[發(fā)明專利]代謝標(biāo)志物在制備腎病綜合征病變進程診斷鑒別試劑中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810617332.2
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108918571B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李愛平;張王寧;李震宇;秦雪梅;楊柳;張麗增
• 申請（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號: G01N24/08
• 分類號: G01N24/08;G01N33/68
• 代理公司: 太原晉科知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 任林芳

1.一種代謝標(biāo)志物在制備腎病綜合征病變進程診斷鑒別試劑中的應(yīng)用，其特征在于：所述代謝標(biāo)志物為亮氨酸、2-羥基丁酸、N-乙酰-谷氨酸和甲硫氨酸的組合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種代謝標(biāo)志物在制備腎病綜合征病變進程診斷鑒別試劑中的應(yīng)用，其特征在于：所述代謝標(biāo)志物源于尿液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種代謝標(biāo)志物在制備腎病綜合征病變進程診斷鑒別試劑中的應(yīng)用，其特征在于：所述代謝標(biāo)記物的篩選方法為：

（1）阿霉素腎病模型的復(fù)制與傳統(tǒng)評價：將大鼠隨機分為空白對照組與阿霉素腎病模型組，阿霉素腎病模型組采用尾靜脈注射阿霉素進行誘導(dǎo)，建立阿霉素腎病模型；利用腎組織病理切片與尿蛋白定量水平進行阿霉素腎病模型評價；

（2）差異代謝物的尋找：在不同時間階段收集各組大鼠的尿液樣品，并分裝成2份備用；對其中1份尿液進行核磁共振即Nuclear Magnetic Resonance，NMR分析，歸屬出代謝物；對另1份進行尿蛋白定量測定；核磁圖譜轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)矩陣，導(dǎo)入到SIMCA-P軟件進行差異代謝物尋找；

（3）計算各差異代謝物的變化率，并結(jié)合線性回歸分析、主成分分析、累計方差貢獻率分析、相關(guān)分析方法篩選、確定腎病綜合征病變進程的進展性標(biāo)志物；

（4）依據(jù)ROC曲線下面積，評估進展性標(biāo)志物的診斷準(zhǔn)確性，進展性標(biāo)志物的曲線下面積大于0.9的標(biāo)志物，作為反映腎病綜合征病變進程的代謝標(biāo)志物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種代謝標(biāo)志物在制備腎病綜合征病變進程診斷鑒別試劑中的應(yīng)用，其特征在于：步驟（2）中核磁圖譜經(jīng)處理轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)矩陣，導(dǎo)入到SIMCA-P軟件進行差異代謝物尋找的具體過程為：對所有圖譜以TSP的化學(xué)位移δ 0.00定標(biāo)，進行手動相位、基線調(diào)整，以δ 0.01對化學(xué)位移δ 0.83-8.48進行積分；其中殘余水峰δ 4.68-5.20不積分，以消除殘余水峰的影響；積分?jǐn)?shù)據(jù)采用面積歸一化處理；最終導(dǎo)出積分?jǐn)?shù)據(jù)矩陣；

對各不同時期空白對照組與阿霉素腎病模型組尿液代謝輪廓數(shù)據(jù)進行主成分分析Principal component analysis, PCA、偏最小二乘法判別分析Partial least squarediscriminate analysis, PLS-DA和正交偏最小二乘法判別分析Orthogonal signalcorrection-partial least square discriminate analysis, OPLS-DA，依據(jù)S-plot分析中相關(guān)系數(shù)Coefficient0.7、VIP1以及兩組間t-test（p0.05）作為判別條件，尋找差異代謝物。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種代謝標(biāo)志物在制備腎病綜合征病變進程診斷鑒別試劑中的應(yīng)用，其特征在于：步驟（3）中具體過程為：以不同時間點為橫坐標(biāo)，以各差異代謝物相對含量的變化率[(M-C)/C]為縱坐標(biāo)，分別對各差異代謝物進行線性回歸分析，選擇實驗進程中變化趨勢一致的差異代謝物，且線性相關(guān)系數(shù)R²≥0.7作為潛在進展性標(biāo)志物；以潛在進展性標(biāo)志物為變量進行PCA，依據(jù)各潛在進展性標(biāo)志物的累計方差貢獻率0.80，篩選出主要的主成分貢獻變量，進一步篩選出潛在進展性標(biāo)志物；以上述潛在進展性標(biāo)志物和各時間點大鼠尿蛋白定量為變量，通過判別每組數(shù)據(jù)的數(shù)據(jù)特征，選擇合適的相關(guān)分析方法，計算二者的相關(guān)系數(shù)，確定進展性標(biāo)志物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種代謝標(biāo)志物在制備腎病綜合征病變進程診斷鑒別試劑中的應(yīng)用，其特征在于：以潛在進展性標(biāo)志物為變量進行PCA，依據(jù)各潛在進展性標(biāo)志物的累計方差貢獻率0.80，篩選出主要的主成分貢獻變量，進一步篩選出潛在進展性標(biāo)志物；具體過程為：

以在整個實驗周期中變化趨勢一致的潛在進展性標(biāo)志物為變量進行PCA，依據(jù)各潛在進展性標(biāo)志物在不同因子上的載荷，選擇載荷值0.80，得出亮氨酸、2-羥基丁酸、鳥氨酸、N-乙酰-谷氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸和馬尿酸為主要的主成分貢獻變量，可作為潛在進展性標(biāo)志物。