[發(fā)明專利]測定復方制劑中靈芝三萜類成分含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810617111.5
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108802255B
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設計）人: 李曄;周巖飛;黃樣增;姚渭溪;吳長輝
• 申請（專利權）人: 福建仙芝樓生物科技有限公司;仙芝科技（福建）股份有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種測定復方制劑中靈芝酸A和靈芝三萜類成分含量的方法，其要點在于：使用乙酸乙酯提取樣品和正己烷除雜，使用HZ816固相萃取小柱對樣液進行純化，定容，過膜得到檢測供試品；使用梯度變化的乙腈、甲醇和水溶液作為高效液相色譜流動相，對供試品進行檢測，以靈芝酸A作為對照品測定樣品中靈芝酸A的含量和靈芝三萜類成分含量。本發(fā)明使用不同溶劑對樣品進行除雜和純化，用固相萃取柱進行純化，有良好的重復性和回收率；優(yōu)化了高效液相色譜測定靈芝酸A的方法，有較好的精密度、穩(wěn)定性和分離度；以靈芝酸A為對照品測定制劑中的靈芝酸A含量，以相對于靈芝酸A的保留時間鑒別其他靈芝三萜類成分，以相對校正因子進行換算測定其含量。

技術領域

本發(fā)明屬于天然產物提取和分析化學領域，具體涉及一種測定復方制劑中靈芝酸A和靈芝三萜類成分含量的方法。

背景技術

靈芝：多孔菌科真菌靈芝的子實體。主要活性成分為靈芝三萜和靈芝多糖，靈芝三萜具有抗腫瘤、抗炎、抗衰老和護肝等藥理功效。靈芝三萜類成分化合物有二百余種，其中靈芝酸A(Ganoderma acid A)最早被研究者從靈芝中分離并鑒定結構；在以往專利及文獻中，靈芝酸A常被作為對照品來檢測靈芝及其提取物的質量。

高效液相色譜(High-performance liquid chromatography,HPLC)技術具有分離效能高、分析速度快、儀器自動化強等特點，可采用多種檢測器以及種類豐富的色譜柱，HPLC技術在各種天然產物成分指標的質量控制中得到不斷推廣和應用。目前在靈芝的應用多為將靈芝用有機溶劑提取得到三萜及甾醇，用十八烷基鍵合硅膠(C18)反向色譜柱進行檢測靈芝三萜類成分含量；將將靈芝用水提取得到靈芝多糖，水解并衍生化后用C18反向色譜柱檢測，內標法檢測單糖組分和含量；或直接將分離純化的單一靈芝多糖使用凝膠排阻色譜柱以出峰時間檢測分子量。以往文獻專利如CN102721764一種靈芝醇提物的質量控制方法和CN102735772 一種靈芝水提物的質量控制方法都需要多種昂貴的對照品如靈芝酸B、C2和G等，配置對照品溶液過程中易受人員操作差異，對照品純度，操作步驟多等各種因素影響，檢測結束后需分別計算各自靈芝三萜類含量，過程較繁瑣且易出現(xiàn)誤差。

中藥質量控制和評價是中藥現(xiàn)代化的瓶頸，中藥多成分的復雜性決定了單一成分或指標評價難以表達中藥的質量，并由此提出多成分質量控制的模式；多指標的質量評價模式，必需有足夠量的化學對照品，由于中藥化學對照品分離難度大，或單體不穩(wěn)定難以供應或供應價格高等因素，致使對照品的供應和使用困難。鑒于目前單成分質量控制尚缺乏對照品供應，更不用說多指標成分的質量控制模式，該模式也僅限于科研，難以應用到實際質量監(jiān)督和評價中。故有學者提出增加指紋圖譜進行質量控制的模式，但指紋圖譜的模糊性特點決定了其難以進行定量分析，增大了在實際生產、監(jiān)督中應用的難度。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種能較為準確測定復方制劑中靈芝酸A和靈芝三萜類成分含量的方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的：一種測定復方制劑中靈芝酸A和靈芝三萜類成分含量的方法，其要點在于：使用乙酸乙酯提取樣品和正己烷除雜，使用HZ816固相萃取小柱對樣液進行純化，定容，過膜得到檢測供試品；使用梯度變化的乙腈、甲醇和水溶液作為高效液相色譜(HPLC)流動相，對供試品進行檢測，以靈芝酸A作為對照品測定樣品中靈芝酸A的含量和靈芝三萜類成分含量。

針對不同成分，樣品制作方法不同：

對于富含非極性成分的樣品：稱取相當于靈芝生藥量200mg重量的復方制劑，100ml正己烷提取，離心棄上清；渣用100ml乙酸乙酯提取，離心取上清，濃縮蒸干，固體用水超聲混懸成懸濁液，加入活化后的HZ816固相萃取小柱上樣，上樣后用5ml水洗柱，棄去，用4ml 甲醇洗脫，洗脫液用甲醇定容5ml，過0.45μm濾膜，即得供試品溶液。