[發(fā)明專利]一種高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810616526.0
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108624513B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設計）人: 吳紅光
• 申請（專利權）人: 成都本則生科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P41/00;C12P7/42;C12R1/645
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 李涵

1.一種高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將斜面保存的串珠鐮孢菌接種入種子培養(yǎng)基中進行種子活化；所述種子培養(yǎng)基包括：甘油5-10g/L、荸薺漿20-30g/L、蛋白胨6-10g/L、天冬酰胺3-8g/L、硫酸銨2-4g/L，調(diào)pH7.0-8.0；

（2）將活化后的種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到發(fā)酵菌液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：葡萄糖20-30g/L、甘油5-10g/L、荸薺漿30-40g/L、無氨基氮源8-12g/L、酵母膏8-12g/L、檸檬酸鈉3-8g/L、纈氨酸硝酸鹽4-8g/L、蜂膠8-12g/L、赤蘚糖醇10-15g/L、MgSO₄.7H₂O 0.4-0.8g/L，K₂HPO₄ 0.8-1.2g/L，調(diào)pH7.0-8.0。

2.根據(jù)權利要求1所述的高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述種子培養(yǎng)基包括：甘油8g/L、荸薺漿25g/L、蛋白胨8g/L、天冬酰胺5g/L、硫酸銨3g/L。

3.根據(jù)權利要求2所述的高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述種子活化步驟的培養(yǎng)溫度為25-30℃，控制搖床轉速140-160rpm，培養(yǎng)時間為8-12h。

4.根據(jù)權利要求1-3任一項所述的高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括：葡萄糖25g/L、甘油8g/L、荸薺漿35g/L、無氨基氮源10g/L、酵母膏10g/L、檸檬酸鈉5g/L、纈氨酸硝酸鹽6g/L、蜂膠10g/L、赤蘚糖醇12g/L、MgSO₄.7H₂O 0.6g/L，K₂HPO₄ 1.0g/L。

5.根據(jù)權利要求4所述的高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述發(fā)酵培養(yǎng)步驟的培養(yǎng)溫度為25-30℃，攪拌速度為140-160rpm，通氣量為1.2-1.8vvm，培養(yǎng)時間為36-48h。

6.根據(jù)權利要求1所述的高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法，其特征在于，所述荸薺漿為以去皮荸薺為原料，加入等量水經(jīng)制漿所得。

7.權利要求1-6任一項所述的高密度培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的方法在酶轉化制備D-泛解酸領域的應用。

8.一種酶轉化法制備D-泛解酸的方法，其特征在于，包括按照權利要求1-6任一項所述方法培養(yǎng)D-泛解酸內(nèi)酯水解酶產(chǎn)生菌的步驟，以及，利用所得菌體為粗酶，對含DL-泛解酸內(nèi)酯的底物選擇性進行酶轉化拆分的步驟，將其中的D-泛解酸內(nèi)酯酶轉化為D-泛解酸。

9.根據(jù)權利要求8所述的酶轉化法制備D-泛解酸的方法，其特征在于，所述底物中含DL-泛解酸內(nèi)酯的濃度為10-70%，所述菌體的加入量為1-2g濕菌體/100mL底物溶液。

10.根據(jù)權利要求8所述的酶轉化法制備D-泛解酸的方法，其特征在于，所述底物中還含有占所述DL-泛解酸內(nèi)酯添加量1-2%的醋酸鈣。