[發明專利]一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法及其應用

在審

• 申請號: 201810616100.5
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN109001385A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 康彥平;廖伯壽;姜慧芳;雷永;晏立英;萬麗云;淮東欣;邱西克
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/02
• 分類號: G01N33/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法及其在篩選抗黃曲霉侵染花生種質資源中的應用。一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于包括以下步驟：(1)選擇黃曲霉菌株；(2)花生莢果的選擇、滅菌和復水；(3)花生莢果接種黃曲霉菌：以黃曲霉菌孢子懸浮液接種健康花生莢果；(4)培養：接種后在培養箱中暗培養7天；(5)培養后的花生莢果感染程度分級；(6)計算花生莢果黃曲霉感染指數；(7)評價抗性等級。本發明操作簡單、易于實施，可高效、準確、批量的鑒定花生莢果的黃曲霉侵染抗性，適合批量篩選抗黃曲霉菌侵染的花生種質資源。為研究花生莢殼對黃曲霉侵染抗性機理和選育抗黃曲霉侵染花生品種奠定基礎。

技術領域

本發明涉及一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法及其在篩選抗黃曲霉侵染花生種質資源中的應用。

背景技術

黃曲霉侵染花生后所產生的次級代謝產物黃曲霉毒素一直是世界范圍內制約花生生產的重要因素，食用被黃曲霉毒素污染的糧食后，能引起人畜中毒及誘發肝癌，而我國又是黃曲霉毒素污染較為嚴重的國家之一。培育抗黃曲霉品種是解決花生黃曲霉及黃曲霉毒素污染最有效、經濟和最安全的方法，而確立一個快速、準確的花生抗黃曲霉侵染的鑒定方法，有利于加快抗黃曲霉花生品種的選育。

花生莢殼是花生抵御黃曲霉侵染的首道屏障，其在花生抗黃曲霉侵染過程中發揮著重要的作用。目前，關于花生莢殼對黃曲霉侵染的抗性鑒定及相關研究還未見報道，本發明所描述的花生莢果抗黃曲霉侵染的室內鑒定方法及其應用，將適用于高效、準確、批量篩選抗黃曲霉侵染花生種質資源，為研究花生莢殼對黃曲霉抗性機理提供寶貴材料，有利于選育抗黃曲霉侵染的花生品種。

目前已報道的關于花生對黃曲霉菌的侵染抗性鑒定方法主要有下列三種方法。1)通過田間接種花生植株來鑒定花生對黃曲霉侵染的抗性，此方法鑒定周期長，且需要大量人工，易受環境中微生物的污染；2)通過人工接種花生仔仁后，采用稱重的方法檢測黃曲霉侵染的程度，此方法雖然操作簡單，但由于不同花生品種被黃曲霉侵染后，其蛋白質、含油量、油酸、亞油酸的含量會出現不同程度的變化，致使其黃曲霉菌的含量結果誤差較大，難以很好的鑒別黃曲霉侵染后花生的抗性水平；3)通過人工觀察統計花生仔仁黃曲霉菌的侵染數量和程度，可以較準確的鑒定花生仔仁對黃曲霉的抗性。此方法對黃曲霉的侵染程度分級較少，如果直接用于花生莢果黃曲霉侵染抗性鑒定中，不能準確的將侵染程度不同的花生莢果分類，因此本發明首次建立了黃曲霉侵染花生莢果9級分類標準，計算花生莢果黃曲霉感染指數并進行抗性評價。

發明內容

針對花生莢殼對黃曲霉侵染抗性的研究目前尚未開展，本發明的目的旨在提供一種高效、準確的花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法及其應用，對花生抗黃曲霉侵染的育種材料進行批量篩選，為研究花生莢殼對黃曲霉侵染抗性機理和選育抗黃曲霉侵染花生品種奠定基礎。

為了實現上述目的，本發明所采取的方案是：一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于包括以下步驟：(1)選擇黃曲霉菌株；(2)花生莢果的選擇、滅菌和復水；(3)花生莢果接種黃曲霉菌：以黃曲霉菌孢子懸浮液接種健康花生莢果；(4)培養：接種后在培養箱中暗培養7天；(5)培養后的花生莢果感染程度分級；(6)計算花生莢果黃曲霉感染指數；(7)評價抗性等級。

一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，具體步驟如下：

(1)選擇黃曲霉菌株：選取一株黃曲霉菌株(侵染能力強)接種于PDA培養基中，30℃培養7天后，用滅菌的質量濃度為0.1％的吐溫水(就是質量濃度為0.1％的吐溫的水溶液)沖洗孢子，收集分生孢子，并重懸分生孢子，得到黃曲霉孢子懸浮液(作為黃曲霉孢子接種懸浮液備用)；