[發明專利]一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法及其應用

在審

• 申請號: 201810616100.5
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN109001385A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 康彥平;廖伯壽;姜慧芳;雷永;晏立英;萬麗云;淮東欣;邱西克
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/02
• 分類號: G01N33/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于包括以下步驟：(1)選擇黃曲霉菌株；(2)花生莢果的選擇、滅菌和復水；(3)花生莢果接種黃曲霉菌：以黃曲霉菌孢子懸浮液接種健康花生莢果；(4)培養：接種后在培養箱中暗培養7天；(5)培養后的花生莢果感染程度分級；(6)計算花生莢果黃曲霉感染指數；(7)評價抗性等級。

2.根據權利要求1所述的一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)選擇黃曲霉菌株：選取一株黃曲霉菌株接種于PDA培養基中，30℃培養7天后，用滅菌的質量濃度為0.1％的吐溫水沖洗孢子，收集分生孢子，并重懸分生孢子，得到黃曲霉孢子懸浮液；

(2)花生莢果的選擇、滅菌和復水：選取花生莢果，用流動的水將花生莢果表面的泥土沖洗干凈，置于無菌的燒杯中；在生物安全柜內，向燒杯中加入滅菌用的質量濃度為1％的NaClO溶液，倒掉NaClO溶液后，花生莢果用無菌水沖洗3次，將花生莢果倒入無菌培養皿中；

(3)花生莢果接種黃曲霉菌：將步驟(1)制備的黃曲霉孢子懸浮液取1mL加入步驟(2)中裝有花生莢果的無菌培養皿內，輕輕轉動無菌培養皿使孢子能均勻附著在莢果表面，擺放花生莢果至花生莢果間保持空隙，互不緊挨；

(4)培養：將步驟(3)中裝有已接種黃曲霉菌的花生莢果的培養皿置于底層含有水分的整理箱中，蓋好箱蓋，置于30℃的恒溫培養箱中黑暗培養7天；

(5)培養后的花生莢果感染程度分級：按花生莢果表面黃曲霉菌附著程度，將花生莢果感染程度進行1-9級分級；

(6)計算花生莢果黃曲霉感染指數(MOI)：

按照公式：花生莢果黃曲霉感染指數＝Σ(各級病果數×相對病級代表數值)/(調查總果數×最高一級代表值)×100，計算每個花生莢果(樣品)的黃曲霉感染指數；

其中，各級病果數為花生莢果感染程度1-9級中的各級受感染花生莢果的總數量；相對病級代表數值為各級花生莢果感染程度的代表值，分別為0、1、2、3、4、5、6、7、8；調查總果數為一個培養皿中花生莢果總數量；最高一級代表值為花生莢果感染程度等級最高級別的代表值8；

(7)評價抗性等級：根據花生莢果黃曲霉感染指數MOI計算所得的最終得分，將花生種質資源分為高抗、中抗、中感和高感黃曲霉。

3.根據權利要求2所述的一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中所述黃曲霉菌株為中國農業科學院油料作物研究所的黃曲霉菌株AF2202。

4.根據權利要求2所述的一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中所述重懸分生孢子為：調整孢子濃度為2×10⁶個孢子/mL。

5.根據權利要求2所述的一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中從開始滅菌到用無菌水沖洗完畢的時間控制在14-16分鐘。

6.根據權利要求2所述的一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中無菌培養皿內花生莢果的質量為30g(即黃曲霉孢子懸浮液與培養皿內花生莢果的配比為1mL：30g)。

7.根據權利要求2所述的一種花生莢果對黃曲霉侵染抗性的室內鑒定方法，其特征在于，步驟(4)中使整理箱內相對濕度為80-90％。