[發明專利]一種結直腸癌實體瘤組織樣本解離液

在審

• 申請號: 201810607219.6
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN110592019A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 張函槊;尹申意
• 申請（專利權）人: 北京吉尚立德生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;張立娜

本發明公開了一種結直腸癌實體瘤組織樣本解離液。本發明提供的樣本解離液由膠原酶I、膠原酶II、膠原酶IV和PBS組成；其中，所述膠原酶I在所述樣本解離液中的終濃度為150?250U/mL；所述膠原酶II在所述樣本解離液中的終濃度為150?250U/mL；所述膠原酶IV在所述樣本解離液中的終濃度為50?150U/mL；余量均為PBS。本發明用溫和細胞解離試劑處理結直腸癌實體瘤組織，最大程度的保證了組織中癌細胞的活力。利用本發明方法得到的結直腸癌原代細胞培養物可以用于多種細胞水平的體外實驗、二代測序、構建動物模型、構建細胞系等等。可以預見，本發明的培養方法和本發明所提供的樣本解離液在結直腸癌的研究和臨床診斷治療領域具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種結直腸癌實體瘤原代細胞的培養方法。

背景技術

結直腸癌是最常見的嚴重威脅人類的健康惡性腫瘤之一。在我國結直腸癌的發病率為9.24％，在所有惡性腫瘤中占第四位。而結直腸癌的死亡率為11.77％，在全部惡性腫瘤中占第五位。隨著經濟的發展、生活水平的提高和生活方式的改變，結直腸癌的發病率還將呈不斷上升的趨勢。另外，結直腸癌復發轉移風險高，超過50％的結直腸癌患者會在根治性治療后數月到數年內出現不同程度的復發轉移。

盡管世界各國的科研和醫療機構對結直腸癌的病因以及發生發展過程的研究都有很大力度的投入，但是人類對這種疾病仍然知之甚少。結直腸癌是一種復雜疾病，其發生、發展是一個動態的過程，涉及到諸多信號分子相互作用，形成了一個復雜的分子調控網絡，同時還受到外界環境因素的影響。結直腸癌的病因和發生發展過程有很強的個體差異性，不能一概而論。因此將結直腸癌實體瘤原代細胞培養物作為模型進行個體化精準研究是結直腸癌研究領域乃至結直腸癌診斷治療領域的趨勢。

如何從腫瘤組織樣本中高效解離出原代腫瘤細胞，并保證腫瘤細胞的活力，可以說這是影響原代腫瘤細胞分離與培養效果中的一個重要環節。

發明內容

為了有效解決上述技術問題，本發明提供了一種新的結直腸癌實體瘤原代細胞培養技術及配套試劑，本發明用溫和細胞解離試劑處理結直腸癌實體瘤組織，最大程度的保證了組織中癌細胞的活力。

第一方面，本發明要求保護一種結直腸癌實體瘤組織樣本解離液。

本發明所提供的樣本解離液由膠原酶I、膠原酶II、膠原酶IV和PBS組成；其中，所述膠原酶I在所述樣本解離液中的終濃度為150-250U/mL(如200U/mL)；所述膠原酶II在所述樣本解離液中的終濃度為150-250U/mL(如200U/mL)；所述膠原酶IV在所述樣本解離液中的終濃度為50-150U/mL(如100U/mL)；余量均為PBS。

其中，用蛋白酶的酶活來定義膠原酶(所述膠原酶I、所述膠原酶II或所述膠原酶IV)的單位U：在37℃，pH 7.5的條件下，用1U蛋白酶處理膠原酶(所述膠原酶I、所述膠原酶II或所述膠原酶IV)5小時，可以釋放L-亮氨酸1μmol。

在本發明的具體實施例中，所述膠原酶I的品牌貨號為Gibco#17100-017；所述膠原酶II的品牌貨號為Gibco#17101-015；所述膠原酶IV的品牌貨號為Gibco#17104-019；所述PBS的品牌貨號為Gibco#21-040-CVR。

進一步地，所述樣本解離液的存在形式可為兩種：

其一，所述樣本解離液為由所述膠原酶I、所述膠原酶II、所述膠原酶IV和所述PBS混合而成的溶液。所述樣本解離液需現配現用。

其二，所述樣本解離液中的各組分單獨存在，使用時按照配方進行配制。

更進一步地，其中的膠原酶I、膠原酶II和膠原酶IV可以儲液(母液)形式存在(-20℃可長期保存)；具體可為10倍或20倍儲液(母液)。