[發(fā)明專利]一種新型提純鎘螯合型免疫復(fù)合物方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810605521.8
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN108802363A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張積仁;李波;王進京;楊萬泉;鐘錦永
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東騰湃醫(yī)療股份有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發(fā)明公開了一種新型提純鎘螯合型免疫復(fù)合物方法，包括以下步驟：步驟一：先將螯合劑溶液配制完成，再將螯合劑溶于溶劑中，即可得到螯合劑溶液，步驟二：取適量載體蛋白，將載體蛋白加入到硼酸鹽緩沖溶液中，即可制得載體蛋白溶液，步驟三：將已制得的螯合劑溶液加入到載體蛋白溶液中，置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴，即可得到混合液，步驟四：自制半透膜，步驟五：預(yù)提純除去未螯合的鎘離子和其它雜離子，步驟六：除去未結(jié)合的載體蛋白。本發(fā)明的提純過程中部分用品自制，因此能夠顯著降低提純成本，工作環(huán)境的要求更低，適用的范圍更加廣泛，使用復(fù)式層析柱有效減少提純和純化時間，一定程度上降低了成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種免疫復(fù)合物領(lǐng)域，具體為一種新型提純鎘螯合型免疫復(fù)合物方法。

背景技術(shù)

免疫復(fù)合物是抗體與抗原結(jié)合所得到的一種復(fù)合物，是由各種免疫細胞、吞噬細菌，病毒，致敏物質(zhì)共同死亡后結(jié)合而形成的，所以又稱抗原-抗體復(fù)合物，在某些情況下，抗原與抗體在體內(nèi)形成的免疫復(fù)合物，沉積于血管壁基底部，從而激活補體，被激活的補體，發(fā)揮溶解細菌、病毒、腫瘤細胞等作用，但是現(xiàn)有提純鎘螯合型免疫復(fù)合物方法，提純的成本較高，提純過程中對實驗研究的環(huán)境要求高，影響使用范圍限制了使用，而提純時間較長，增加了提純和純化的時間。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種新型提純鎘螯合型免疫復(fù)合物方法及其制備方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種新型提純鎘螯合型免疫復(fù)合物方法，包括以下步驟：

步驟一：先將螯合劑溶液配制完成，再將螯合劑溶于溶劑中，即可得到螯合劑溶液；

步驟二：取適量載體蛋白，將載體蛋白加入到硼酸鹽緩沖溶液中，即可制得載體蛋白溶液；

步驟三：將已制得的螯合劑溶液加入到載體蛋白溶液中，置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴，即可得到混合液；

步驟四：自制半透膜，向光滑、潔凈、干燥的250ml錐形瓶中倒入火棉膠溶液，小心轉(zhuǎn)動容器，使火棉膠溶液均勻附在壁上成一薄層，傾出多余的溶液，然后將容器倒置，進一步將多余溶液流盡和使溶劑乙醚揮發(fā)掉，直至用手指輕觸所形成的膜而不粘著方可，然后往容器中加水至滿為止，遇水后在乙醚未蒸發(fā)干的地方會發(fā)白，制成半透膜，將瓶口上的膜脫開，并在膜與容器壁間注入水，使膜自動脫離瓶壁，輕輕取出制成的袋形半透膜，檢查是否有孔洞，如果有則不能使用，應(yīng)重新制作，若將膜袋浸入不同濃度的乙醇水溶液中，則可得到不同滲透度的膜，按此法制作的半透膜不使用時，則應(yīng)存放于水中，以免損壞；

步驟五：預(yù)提純除去未螯合的鎘離子和其它雜離子，在將3-5組半透膜按內(nèi)外次序排列后加入EDTA溶液煮沸10min，棄廢液后用ddH₂O沖洗，重復(fù)該步驟2-4次，步驟三中的混合液裝入處理后的多層半透膜中，用ddH₂O透析換水，4℃透析過夜之后，收集液體；

步驟六：除去未結(jié)合的載體蛋白，取未使用的復(fù)式層析柱，用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在上層層析柱中裝入能與鎘離子特異性結(jié)合的填料，在下層層析柱中裝入能與載體蛋白特異性結(jié)合的填料，裝柱后，繼續(xù)使用稀釋緩沖液K₂HPO₄平衡層析柱，待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液K₂HPO₄稀釋步驟四中的樣品，然后上柱，載體蛋白與填料特異性結(jié)合，使用稀釋緩沖液K₂HPO₄沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫，收集得到的洗脫液，裝入半透膜，用ddH₂O透析，換水2-4次后，4℃透析過夜，收集樣本，即可得到高純度的鎘螯合型免疫復(fù)合物。

優(yōu)選的，免疫復(fù)合物或載體蛋白的結(jié)構(gòu)中至少含有鋅指結(jié)構(gòu)、巰基、半胱氨酸殘基中的一種，鎘離子與免疫復(fù)合物或載體蛋白與鋅指結(jié)構(gòu)或巰基或半胱氨酸殘基相結(jié)合。