[發明專利]一種新型提純鎘螯合型免疫復合物方法

在審

• 申請號: 201810605521.8
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN108802363A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 張積仁;李波;王進京;楊萬泉;鐘錦永
• 申請（專利權）人: 廣東騰湃醫療股份有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.一種新型提純鎘螯合型免疫復合物方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：先將螯合劑溶液配制完成，再將螯合劑溶于溶劑中，即可得到螯合劑溶液；

步驟二：取適量載體蛋白，將載體蛋白加入到硼酸鹽緩沖溶液中，即可制得載體蛋白溶液；

步驟三：將已制得的螯合劑溶液加入到載體蛋白溶液中，置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴，即可得到混合液；

步驟四：自制半透膜，向光滑、潔凈、干燥的250ml錐形瓶中倒入火棉膠溶液，小心轉動容器，使火棉膠溶液均勻附在壁上成一薄層，傾出多余的溶液，然后將容器倒置，進一步將多余溶液流盡和使溶劑乙醚揮發掉，直至用手指輕觸所形成的膜而不粘著方可，然后往容器中加水至滿為止，遇水后在乙醚未蒸發干的地方會發白，制成半透膜，將瓶口上的膜脫開，并在膜與容器壁間注入水，使膜自動脫離瓶壁，輕輕取出制成的袋形半透膜，檢查是否有孔洞，如果有則不能使用，應重新制作，若將膜袋浸入不同濃度的乙醇水溶液中，則可得到不同滲透度的膜，按此法制作的半透膜不使用時，則應存放于水中，以免損壞；

步驟五：預提純除去未螯合的鎘離子和其它雜離子，在將3-5組半透膜按內外次序排列后加入EDTA溶液煮沸10min，棄廢液后用ddH₂O沖洗，重復該步驟2-4次，步驟三中的混合液裝入處理后的多層半透膜中，用ddH₂O透析換水，4℃透析過夜之后，收集液體；

步驟六：除去未結合的載體蛋白，取未使用的復式層析柱，用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在上層層析柱中裝入能與鎘離子特異性結合的填料，在下層層析柱中裝入能與載體蛋白特異性結合的填料，裝柱后，繼續使用稀釋緩沖液K₂HPO₄平衡層析柱，待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液K₂HPO₄稀釋步驟四中的樣品，然后上柱，載體蛋白與填料特異性結合，使用稀釋緩沖液K₂HPO₄沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫，收集得到的洗脫液，裝入半透膜，用ddH₂O透析，換水2-4次后，4℃透析過夜，收集樣本，即可得到高純度的鎘螯合型免疫復合物。

2.根據權利要求1的鎘螯合型免疫復合物，其特征在于:免疫復合物或載體蛋白的結構中至少含有鋅指結構、巰基、半胱氨酸殘基中的一種，鎘離子與免疫復合物或載體蛋白與鋅指結構或巰基或半胱氨酸殘基相結合。

3.根據權利要求1的鎘螯合型免疫復合物，其特征在于:載體蛋白為抗體蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、核抗原、異種血清抗原、病毒、細菌、原蟲、蠕蟲或免疫球蛋白之中的一種。

4.根據權利要求1的鎘螯合型免疫復合物，其特征在于，鎘離子通過螯合劑與載體蛋白結合后再與能和載體蛋白特異性結合的抗體結合，螯合劑為ITCBE、EDTA、多磷酸鹽、氨基羧酸、1,3-二酮、羥基羧酸中的一種。

5.一種定性檢測鎘螯合型循環免疫復合物的方法，其特征在于，以已知含量的權利要求1的鎘螯合型免疫復合物作為標準品，采用以下方法之一對樣品進行檢測：酶聯免疫法、酶聯免疫與原子吸收光譜結合法、酶聯免疫與電感耦合等離子體質譜結合法、提純免疫復合物與原子吸收光譜結合法、提純免疫復合物與電感耦合等離子體質譜結合法、電泳與酶聯免疫或原子吸收光譜或電感耦合等離子體質譜結合法。