[發明專利]一種細胞穿膜肽及其制備方法、應用

在審

• 申請號: 201810604034.X
• 申請日: 2018-06-12
• 公開（公告）號: CN108794579A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 唐偉;郭曉霞;劉巖松;段茹;許力;柳項
• 申請（專利權）人: 肽澤(武漢)生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/04;C12N15/87
• 代理公司: 武漢知產時代知識產權代理有限公司 42238
• 代理人: 曹雄

本發明公開了一種細胞穿膜肽及其制備方法、應用，所述細胞穿膜肽包括如下序列：RRRRRKQARRPRRRRAR。且所述細胞穿膜肽安全，穿膜效果顯著。

技術領域

本發明涉及生物醫學領域，尤其涉及一種人源性細胞穿膜肽及其制備方法、應用。

背景技術

機體細胞膜屏障僅僅允許分子量小于600Da的非脂溶性分子進入活細胞，雖對機體有重要的保護作用，但也使許多有應用前景的藥物被摒棄。細胞穿膜肽(cell-penetrating peptides，CPPs)，是一些小于30個氨基酸的短肽，能夠攜帶分子量比自身大許多倍的分子進入細胞。細胞穿膜肽有多種分類方式，根據理化性質可以分為陽離子、雙親性和疏水性穿膜肽。

在生物體內，蛋白質帶正電荷的序列能增強蛋白質與RNA的結合，從而發揮對RNA調控或者選擇性剪切的功能。因此，可以通過搜索具有此類功能的蛋白以篩選陽離子穿膜肽。但目前尚未開發出具有上述功能的陽離子穿膜肽。

發明內容

針對上述現有技術中的缺陷，本發明提供了一種人源性細胞穿膜肽及其制備方法、應用，且所述細胞穿膜肽安全，穿膜效果顯著。

本發明為解決上述技術問題所提供的技術方案如下：

一方面，提供了一種細胞穿膜肽，其包括如下序列：RRRRRKQARRPRRRRAR。

另一方面，還提供了一種上述細胞穿膜肽的制備方法，其包括如下步驟：

S1、提供樹脂，且將所述樹脂在第一溶劑中浸泡至所述樹脂溶脹；

S2、將氨基酸、縮合劑溶于第二溶劑中，形成混合物；

S3、在所述混合物加入溶脹的樹脂中形成反應體系，反應時間為1-4h；

S4、去除反應后所述反應體系中的溶液，對殘留物洗滌1-5次，氣體鼓動，抽干；

S5、在所述殘留物中加入脫帽液，氣體鼓動，抽干；

S6、去除經由步驟S5后的反應體系中的溶液，洗滌1-10次，氣體鼓動，抽干，由此獲得合成的多肽鏈；

S7、在所述多肽鏈中加入切割液，在4-30℃下攪拌1-4h，過濾得濾液，且洗滌所述濾液；

S8、對經洗滌過的濾液進行萃取，離心得到細胞穿膜肽粗品；

以及S9、對所述細胞穿膜肽粗品進行鑒定和純化。

優選的，所述樹脂包括Fmoc-Wang樹脂。

優選的，在步驟S2中，所述縮合劑包括苯并三唑鎓鹽型縮合劑；在步驟S1中，所述第一溶劑包括：二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二氯甲烷及四氫呋喃中的一種或幾種；在步驟S5中，所述脫帽液包括：二甲基甲酰胺溶液，以及溶解于二甲基甲酰胺溶液中的6％W/V的哌嗪和0.1M HOBT；在步驟S7中，所述切割液包括：以重量百分數計，95％的TFA、2％的TIS以及3％的H₂O。

優選的，所述苯并三唑鎓鹽型縮合劑包括O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸鹽、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸鹽中的一種或幾種。

優選的，每種氨基酸與所述樹脂的投料摩爾量比例為(1:1)-(10:1)；所述縮合劑與所述樹脂的投料摩爾量比例為(1:1)-(10:1)。

優選的，所述步驟S8中，所述萃取包括：在經洗滌過的濾液中加入無水乙醚，放置1-4h；且所述無水乙醚與濾液的體積比為(5:1)-(60:1)。

另一方面，還提供一種上述細胞穿膜肽的應用方法，所述細胞穿膜肽用于在C端或N端共價或非共價連接標記物或載物分子，并攜帶所述標記物或載物分子穿過細胞膜進入細胞。