[發明專利]高通量測定血清中25-羥基維生素D的定量檢測方法

有效

• 申請號: 201810602140.4
• 申請日: 2018-06-12
• 公開（公告）號: CN108732285B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 高飛;海云;陳亮;欒羽;張志棟;黃新良;徐可豐;李冰;羅示齊;王萬強;黃曙;劉禮歡;周響響;應海媚
• 申請（專利權）人: 杭州度安醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 張歡勇

本發明公布一高通量測定血清中25?羥基維生素D的定量檢測方法，包括以下步驟：待測樣本的前處理：取樣品加入含有25?羥基維生素D同位素的內標物，渦旋震蕩完成蛋白沉淀，加入特丁基甲醚渦旋震蕩萃取，并離心得到上清液，氮氣吹干所述上清液，并加入復溶液，渦旋震蕩后離心得到待測樣本；超高效液相色譜?串聯質譜檢測所述待測樣本，獲得所述待測樣本的內標峰以及對應內標峰面積；以及代入所述待測樣本的峰面積與對應內標峰面積的比值到回歸方程，得到待測樣本的含量，其中所述回歸方程反應標準品峰面積與對應內標峰面積比值和標準品溶液濃度之間的關系。

技術領域

本發明涉及維生素D檢測的領域，特別涉及一種高通量測定血清中25-羥基維生素D的定量檢測方法，所述定量測定方法精準快速地獲取25-羥基維生素D的定量數據。

背景技術

維生素D是一類脂溶性維生素，在維持人體內鈣的動態平衡方面起著非常重要的作用，其能和鈣一起促進兒童骨骼的形成和維持成人骨骼的強度。此外，維生素D還有著廣泛的非骨骼效應，與心血管疾病、免疫疾病、糖尿病和腫瘤等疾病密切相關，維生素D的缺乏可導致骨骼發育受損，以及各類慢性疾病的發病風險增加，如類風濕性關節炎、軟骨化、冠心病、糖尿病和腫瘤等。

人體內維生素D的來源主要有兩個途徑，一是通過膳食途徑攝入的維生素D2(酵母或真菌)和維生素D3(魚、魚肝油或蛋黃)，二是機體經光照將皮膚中的7-脫氫膽甾醇轉化為維生素D3。然而這些維生素D在肝臟中可轉化為25-羥基維生素D(25-OHD)，從而被機體轉運或儲藏，另外，25-OHD在體內穩定，半衰期長，其濃度水平與體內維生素D含量直接相關，因此25-OHD可作為一類主要的生物標志物用于體現機體維生素D水平。

目前，25-OHD的檢測方法有多種，包括免疫檢測、HPLC法和LC-MS/MS方法等。其中，由于25-羥基維生素D在人體內主要與血清結合蛋白DBP結合，且人體內存在大量的高親和力結合蛋白，因此在檢測時存在嚴重的基質干擾，而傳統的放射免疫法和競爭蛋白結合法，不能有效祛除基質干擾，對比而言，LC-MS/MS法具有特異性強、準確度高、分析時間短等特點，被認為是評價機體維生素D營養狀況的“金標準”。

現有公開專利文獻申請號201510530370.0“超高效液相色譜串聯質譜檢測血清25羥基維生素D的方法”以及2008年10月公布的“THE ANNALYS OF 25-HYDROXYVITAMIN D INSERUM USING UPLC/MS/MS”的文獻公開了一種利用超高效液相色譜串聯質譜法檢測25羥基維生素D的方法，但是其公開的方法存在兩大不可避免的缺陷：1.只著重于強調定性檢測25羥基維生素D的方法，無法同時準確定量25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3的含量，也無法給出準確的25-羥基維生素D的含量，雖然在文獻中稍微待過提及定量檢測的可能性，但是其具體方案并無揭露。2.待測樣本的前處理步驟過于繁瑣，進而導致分析時間長，方法的特異性差，檢測通量低。

綜上所述，為了更好地高效檢測25-羥基維生素D，急需一種在原有檢測方法基礎上更加優化并且可高通量定量檢測25-羥基維生素D的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一高通量測定血清中25-羥基維生素D的定量檢測方法，所述定量測定方法可被用于高通量地獲取25-羥基維生素D的定量數據，且其方法的檢測時間短，且有高靈敏度，滿足臨床檢測的需求。

本發明的目的在于提供一高通量測定血清中25-羥基維生素D的定量檢測方法，所述定量測定方法改進現有技術的定性檢測方法，待測樣本的前處理步驟簡單易處理，又便于操作。

本發明的目的在于提供一高通量快速測定血清中25-羥基維生素D的定量檢測方法 ，所述定量測定方法可準確分離并且分別獲取25-羥基維生素D2和25-羥基維生素D3的含量。

本發明的目的在于提供一高通量測定血清中25-羥基維生素D的定量檢測方法，所述定量測定方法被應用于獲取25-羥基維生素D的準確含量數據，從而被應用于評價機體維生素D營養狀況。