[發明專利]一種具有大斯托克斯位移的重組熒光蛋白質及其制備方法有效
| 申請號： | 201810600293.5 | 申請日： | 2018-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN108841846B | 公開（公告）日： | 2021-08-06 |
| 發明（設計）人： | 陳華新;姜鵬 | 申請（專利權）人： | 中國科學院海洋研究所 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C07K14/795 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 李穎 |
| 地址： | 266071 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 具有 斯托 位移 重組 熒光 蛋白質 及其 制備 方法 | ||
1.一種大腸桿菌中具有大斯托克斯位移的重組藻藍蛋白類熒光蛋白質的制備方法，其特征在于：
1）利用基因工程方法，將藻膽蛋白裂合酶基因cpcS插入第一個表達載體中，將藻藍蛋白β亞基基因cpcB和藻膽蛋白裂合酶cpcT組成多順反子插入第二個表達載體的一個表達框中，將血紅素氧化酶基因Ho1和藻紅膽素還原酶基因pebS組成多順反子插入到第二個表達載體的另一個表達框中；所述第一個表達載體需要阿拉伯糖誘導外源基因的表達，含有阿拉伯糖誘導啟動子；第二個表達載體需要乳糖誘導外源基因的表達，含有乳糖誘導啟動子；
2）將上述兩個載體共轉化到大腸桿菌中，先添加乳糖，后添加阿拉伯糖，在不同時機誘導外源基因表達，發酵合成獲得共價結合一個藻尿膽素分子和一個藻紅膽素分子的重組藻藍蛋白類熒光蛋白質，通過親和層析的方法，純化得到相應的重組熒光蛋白質。
2.按權利要求1所述的大腸桿菌中具有大斯托克斯位移的重組藻藍蛋白類熒光蛋白質的制備方法，其特征在于：所述第一個表達載體為pBad-HisA，pBad-HisB或pBad-HisC；第二個表達載體為pRSFDuet-1，pCDFDuet-1或pACYCDuet-1。
3.一種利用權利要求1制備方法獲得的具有大斯托克斯位移的重組藻藍蛋白類熒光蛋白質，其特征在于：其為共價結合一個藻紅膽素分子和一個藻尿膽素分子的斯托克斯位移達68.5 nm的重組藻藍蛋白類熒光蛋白質。
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