[發(fā)明專利]一種小球藻保存方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810599963.6 | 申請日： | 2018-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN108753623A | 公開（公告）日： | 2018-11-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周建波 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘭溪市沉默生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/12 | 分類號： | C12N1/12;C12N1/04;C12R1/89 |
| 代理公司： | 北京國翰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 呂彩霞 |
| 地址： | 321102 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 小球藻 保存 蘆薈提取物 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 藻粉 培養(yǎng)液 蒸餾水 金花茶葉提取物 葉綠素 茶葉提取物 生物學(xué)活性 小球藻藻液 對數(shù)生長 高成活率 活性多糖 細(xì)胞結(jié)構(gòu) 重要指標(biāo) 甘油 長時(shí)效 活性高 濃縮液 生物量 錫箔紙 微波爐 恒重 接種 復(fù)活 濃縮 封閉 | ||
1.一種小球藻保存方法，其特征在于：包括：
培養(yǎng)：將小球藻接種于培養(yǎng)液中封閉培養(yǎng)，接種后及加水?dāng)U種后施用無機(jī)肥碳酸氫銨與過磷酸鈣，每天監(jiān)測試驗(yàn)池的藻細(xì)胞密度和水化學(xué)指標(biāo)，將微藻培養(yǎng)至對數(shù)生長期，待用；
濃縮：取對數(shù)期小球藻藻液，離心去除上清液得小球藻濃縮液，然后置于微波爐中干燥至恒重，得到微波干燥藻粉；
保存：將干燥藻粉與蒸餾水置于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，然后添加甘油、茶葉提取物、蘆薈提取物，用錫箔紙完全包裹住細(xì)胞培養(yǎng)瓶保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)液為NaNO378～80mg/L、NaH2PO4·H2O3～4mg/L、Na2SiO3·9H2O22～25mg/L、Na2EDTA4.36～4.4mg/L、FeCl3·6H2O3.16～3.2mg/L、CuSO4·5H2O0.01～0.015mg/L、ZnSO4·7H2O0.023～0.025mg/L、CoCL2·6H2O0.012～0.015mg/L、MnCL·4H2O0.18～0.2mg/L、Na2MoO4·2H2O0.07～0.08mg/L、維生素B1 0.1～0.12μg/L、維生素B12 0.5～0.6μg/L、生物素0.8～1μg/L，余量為無菌室，在121℃下滅菌20min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)光照周期為10～12L:12～14D，溫度為20～22℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)期間主要水化學(xué)指標(biāo)為：水溫為10.0～12.5℃，鹽度為19～21，pH為8.55～9.33，溶解氧為15.2～20.0mg/L，氨態(tài)氮為24.29～70.95mg/L，活性磷為0.71～2.37mg/L，透明度為11～18cm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，甘油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5～0.8%，金花茶提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.2～1.5%，蘆薈提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.5～6.0%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，金花茶提取物的制備方法為：將金花茶葉粉以乙醇溶液滲濾提取得浸膏，將浸膏置于含有0.85～0.88‰2,2-二苯基環(huán)戊醇的正丁醇溶劑中萃取，萃取物即為金花茶葉正丁醇提取物，經(jīng)真空干燥制成浸膏待用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，蘆薈提取物的制備方法為：將蘆薈藥材研磨成微小顆粒，置于容器中，加入去離子水、復(fù)合酶、戊二醇與t-亮氨酸叔丁酯酶解，酶解液過0.35～0.45μm的濾膜過濾，取濾液干燥至相對密度為1.05～1.08即得蘆薈提取液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述蘆薈提取物的制備方法中，酶解pH為7.4～7.6，酶解溫度為42～45℃，酶解時(shí)間為25～45min。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述蘆薈提取物的制備方法中，復(fù)合酶的添加量為蘆薈藥材重量的3～12%，戊二醇的添加量為復(fù)合酶重量的15～18‰，t-亮氨酸叔丁酯的添加量為復(fù)合酶重量的3～3.6‰，復(fù)合酶為重量比為1:3～5的胰蛋白酶與木瓜蛋白酶。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于1～2℃、無菌、充氧、黑暗環(huán)境中保存。
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