[發(fā)明專利]一種小球藻保存方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810599963.6
• 申請(qǐng)日: 2018-06-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108753623A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周建波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘭溪市沉默生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/12
• 分類號(hào): C12N1/12;C12N1/04;C12R1/89
• 代理公司: 北京國(guó)翰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696
• 代理人: 呂彩霞

1.一種小球藻保存方法，其特征在于：包括：

培養(yǎng)：將小球藻接種于培養(yǎng)液中封閉培養(yǎng)，接種后及加水?dāng)U種后施用無(wú)機(jī)肥碳酸氫銨與過(guò)磷酸鈣，每天監(jiān)測(cè)試驗(yàn)池的藻細(xì)胞密度和水化學(xué)指標(biāo)，將微藻培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，待用；

濃縮：取對(duì)數(shù)期小球藻藻液，離心去除上清液得小球藻濃縮液，然后置于微波爐中干燥至恒重，得到微波干燥藻粉；

保存：將干燥藻粉與蒸餾水置于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，然后添加甘油、茶葉提取物、蘆薈提取物，用錫箔紙完全包裹住細(xì)胞培養(yǎng)瓶保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)液為NaNO₃78～80mg/L、NaH₂PO₄·H₂O3～4mg/L、Na₂SiO₃·9H₂O22～25mg/L、Na₂EDTA4.36～4.4mg/L、FeCl₃·6H₂O3.16～3.2mg/L、CuSO₄·5H₂O0.01～0.015mg/L、ZnSO₄·7H₂O0.023～0.025mg/L、CoCL₂·6H₂O0.012～0.015mg/L、MnCL·4H₂O0.18～0.2mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O0.07～0.08mg/L、維生素B1 0.1～0.12μg/L、維生素B12 0.5～0.6μg/L、生物素0.8～1μg/L，余量為無(wú)菌室，在121℃下滅菌20min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)光照周期為10～12L:12～14D，溫度為20～22℃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)期間主要水化學(xué)指標(biāo)為：水溫為10.0～12.5℃，鹽度為19～21，pH為8.55～9.33，溶解氧為15.2～20.0mg/L，氨態(tài)氮為24.29～70.95mg/L，活性磷為0.71～2.37mg/L，透明度為11～18cm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，甘油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5～0.8%，金花茶提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.2～1.5%，蘆薈提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.5～6.0%。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，金花茶提取物的制備方法為：將金花茶葉粉以乙醇溶液滲濾提取得浸膏，將浸膏置于含有0.85～0.88‰2,2-二苯基環(huán)戊醇的正丁醇溶劑中萃取，萃取物即為金花茶葉正丁醇提取物，經(jīng)真空干燥制成浸膏待用。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，蘆薈提取物的制備方法為：將蘆薈藥材研磨成微小顆粒，置于容器中，加入去離子水、復(fù)合酶、戊二醇與t-亮氨酸叔丁酯酶解，酶解液過(guò)0.35～0.45μm的濾膜過(guò)濾，取濾液干燥至相對(duì)密度為1.05～1.08即得蘆薈提取液。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述蘆薈提取物的制備方法中，酶解pH為7.4～7.6，酶解溫度為42～45℃，酶解時(shí)間為25～45min。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述蘆薈提取物的制備方法中，復(fù)合酶的添加量為蘆薈藥材重量的3～12%，戊二醇的添加量為復(fù)合酶重量的15～18‰，t-亮氨酸叔丁酯的添加量為復(fù)合酶重量的3～3.6‰，復(fù)合酶為重量比為1:3～5的胰蛋白酶與木瓜蛋白酶。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法，其特征在于：所述保存步驟中，細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于1～2℃、無(wú)菌、充氧、黑暗環(huán)境中保存。