[發(fā)明專利]一種小球藻保存方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810599963.6 | 申請(qǐng)日: | 2018-06-12 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN108753623A | 公開(kāi)(公告)日: | 2018-11-06 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 周建波 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 蘭溪市沉默生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào): | C12N1/12 | 分類號(hào): | C12N1/12;C12N1/04;C12R1/89 |
| 代理公司: | 北京國(guó)翰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696 | 代理人: | 呂彩霞 |
| 地址: | 321102 浙江省*** | 國(guó)省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 小球藻 保存 蘆薈提取物 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 藻粉 培養(yǎng)液 蒸餾水 金花茶葉提取物 葉綠素 茶葉提取物 生物學(xué)活性 小球藻藻液 對(duì)數(shù)生長(zhǎng) 高成活率 活性多糖 細(xì)胞結(jié)構(gòu) 重要指標(biāo) 甘油 長(zhǎng)時(shí)效 活性高 濃縮液 生物量 錫箔紙 微波爐 恒重 接種 復(fù)活 濃縮 封閉 | ||
1.一種小球藻保存方法,其特征在于:包括:
培養(yǎng):將小球藻接種于培養(yǎng)液中封閉培養(yǎng),接種后及加水?dāng)U種后施用無(wú)機(jī)肥碳酸氫銨與過(guò)磷酸鈣,每天監(jiān)測(cè)試驗(yàn)池的藻細(xì)胞密度和水化學(xué)指標(biāo),將微藻培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,待用;
濃縮:取對(duì)數(shù)期小球藻藻液,離心去除上清液得小球藻濃縮液,然后置于微波爐中干燥至恒重,得到微波干燥藻粉;
保存:將干燥藻粉與蒸餾水置于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,然后添加甘油、茶葉提取物、蘆薈提取物,用錫箔紙完全包裹住細(xì)胞培養(yǎng)瓶保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述培養(yǎng)步驟中,培養(yǎng)液為NaNO378~80mg/L、NaH2PO4·H2O3~4mg/L、Na2SiO3·9H2O22~25mg/L、Na2EDTA4.36~4.4mg/L、FeCl3·6H2O3.16~3.2mg/L、CuSO4·5H2O0.01~0.015mg/L、ZnSO4·7H2O0.023~0.025mg/L、CoCL2·6H2O0.012~0.015mg/L、MnCL·4H2O0.18~0.2mg/L、Na2MoO4·2H2O0.07~0.08mg/L、維生素B1 0.1~0.12μg/L、維生素B12 0.5~0.6μg/L、生物素0.8~1μg/L,余量為無(wú)菌室,在121℃下滅菌20min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述培養(yǎng)步驟中,培養(yǎng)光照周期為10~12L:12~14D,溫度為20~22℃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述培養(yǎng)步驟中,培養(yǎng)期間主要水化學(xué)指標(biāo)為:水溫為10.0~12.5℃,鹽度為19~21,pH為8.55~9.33,溶解氧為15.2~20.0mg/L,氨態(tài)氮為24.29~70.95mg/L,活性磷為0.71~2.37mg/L,透明度為11~18cm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述保存步驟中,甘油的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5~0.8%,金花茶提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.2~1.5%,蘆薈提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.5~6.0%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述保存步驟中,金花茶提取物的制備方法為:將金花茶葉粉以乙醇溶液滲濾提取得浸膏,將浸膏置于含有0.85~0.88‰2,2-二苯基環(huán)戊醇的正丁醇溶劑中萃取,萃取物即為金花茶葉正丁醇提取物,經(jīng)真空干燥制成浸膏待用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述保存步驟中,蘆薈提取物的制備方法為:將蘆薈藥材研磨成微小顆粒,置于容器中,加入去離子水、復(fù)合酶、戊二醇與t-亮氨酸叔丁酯酶解,酶解液過(guò)0.35~0.45μm的濾膜過(guò)濾,取濾液干燥至相對(duì)密度為1.05~1.08即得蘆薈提取液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述蘆薈提取物的制備方法中,酶解pH為7.4~7.6,酶解溫度為42~45℃,酶解時(shí)間為25~45min。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述蘆薈提取物的制備方法中,復(fù)合酶的添加量為蘆薈藥材重量的3~12%,戊二醇的添加量為復(fù)合酶重量的15~18‰,t-亮氨酸叔丁酯的添加量為復(fù)合酶重量的3~3.6‰,復(fù)合酶為重量比為1:3~5的胰蛋白酶與木瓜蛋白酶。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小球藻保存方法,其特征在于:所述保存步驟中,細(xì)胞培養(yǎng)瓶置于1~2℃、無(wú)菌、充氧、黑暗環(huán)境中保存。
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