[發明專利]柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測試劑盒和方法在審
| 申請號： | 201810596969.8 | 申請日： | 2018-06-11 |
| 公開（公告）號： | CN108441582A | 公開（公告）日： | 2018-08-24 |
| 發明（設計）人： | 曹孟籍;李敏;李中安 | 申請（專利權）人： | 西南大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/94 |
| 代理公司： | 重慶市前沿專利事務所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 鄒曉艷 |
| 地址： | 400715*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鱗皮 柑橘 試劑盒 病毒 總RNA 擴增 引物 | ||
1.一種柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：包括外引物對F3-5/B3-5和內引物對FIP3-5/BIP3-5，所述內、外引物對的序列為：
F3-5:5’-CTTTGAGTCCATCAACTGTT-3’，
B3-5:5’-TCACTCTGAAGCTGACAT-3’，
FIP-5:5’-GGTGAAGGACCAACTAGGACGTTGCTGAAATCTGCCTC-3’，
BIP-5:5’-GAAACCCCTTGTTCTTGTCGGGTGCTATAATTTACAGCCTCA-3’。
2.如權利要求1所述的柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測試劑盒，其特征在于：還包括LAMP Kit。
3.一種柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：提取待測樣品的總RNA，以總RNA為模板，利用權利要求1或2所述的試劑盒進行RT-LAMP擴增，擴增條件為：58～68℃擴增40～80min，對擴增產物進行鑒定。
4.如權利要求3所述的柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測方法，其特征在于：所述擴增產物進行鑒定的方法為凝膠電泳成像和紫外成像。
5.如權利要求3所述的柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測方法，其特征在于：所述擴增條件為：60℃擴增60min。
6.如權利要求3或4或5所述的柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測方法，其特征在于：所述內引物、外引物的濃度比為2～12：1。
7.如權利要求6所述的柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測方法，其特征在于：所述內引物、外引物的濃度比為8：1。
8.如權利要求7所述的柑橘鱗皮病毒的RT-LAMP檢測方法，其特征在于：反應體系為：WarmStartLAMP 2×Mix 12.5μL、10μmol/L的F3/B3 0.5μL、10μmol/L的FIP/BIP 4μL、RNA 2μL加水補足至25μL。
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