[發(fā)明專利]檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA引物、探針、試劑盒和方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810585976.8
• 申請(qǐng)日: 2018-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN108728559A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘭全學(xué);嚴(yán)瓊英;楊平;陳佳平;王遠(yuǎn)洋;王曉雯;劉靈燕;楊國(guó)武;盛司潼;孫文龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院（國(guó)家高新技術(shù)計(jì)量站;國(guó)家數(shù)字電子產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心）;深圳華因康基因科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1. 一種檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA引物，其特征在于，針對(duì)rfbE 基因包括

上游引物Seq ID No.1: 5’-AAAGGTAAATATGTGGGTTGATAACGACTA-3’和下游引物Seq IDNo.2：5’-AAAATCATCAGCTTGTTCATTCACCCGATA-3’。

2. 一種檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA引物，其特征在于，采用權(quán)利要求1所述的引物中的上游引物、下游引物中的至少一種，或選自權(quán)利要求1所述的引物中的上游引物、下游引物序列或上游引物、下游引物序列的互補(bǔ)鏈序列中單條序列同源性為50%及以上的堿基序列。

3.一種檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA探針，其特征在于，針對(duì)rfbE基因，其包括探針序列Seq ID No.3：5’- TGGAATGGTTGTCACGAATGACAAAAGTGTACTAGAGGCTTCAAAAC -3’

所述探針序列Seq ID No.3的5’端32bp 的位置處采用dSpacer 修飾，dSpacer分子兩側(cè)的胸腺嘧啶分別被熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)取代，所述探針序列Seq ID No.3的3’末端通過阻塞基團(tuán)C3Spacer或磷酸化進(jìn)行修飾。

4.如權(quán)利要求3所述的檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA探針，其特征在于，所述熒光基因采用FAM-dT熒光標(biāo)記基團(tuán)，所述淬滅基團(tuán)采用BHQ1-dT熒光標(biāo)記基團(tuán)。

5.一種檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA探針，其特征在于，采用權(quán)利要求3所述的探針序列或其互補(bǔ)鏈序列中單條序列同源性為50%及以上的堿基序列。

6.一種檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA試劑盒，其特征在于，包括含有如權(quán)利要求1所述的引物和如權(quán)利要求3或5所述的探針以凍干粉形式的RPA反應(yīng)組分、RPA反應(yīng)緩沖液。

7.一種檢測(cè)大腸埃希氏菌O157的RPA方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）提取待測(cè)樣品基因組DNA；

（2）采用權(quán)利要求6所述的試劑盒、步驟(1)提取的待測(cè)樣品基因組DNA以及醋酸鎂，配制成RPA反應(yīng)體系；

（3）將步驟（2）配置的反應(yīng)體系在恒溫下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，整個(gè)反應(yīng)過程收集熒光信號(hào)；

（4）根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)果確定待測(cè)樣品基因組DNA中是否含有大腸埃希氏菌O157。