[發(fā)明專(zhuān)利]一種FADV A病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810584756.3
• 申請(qǐng)日: 2018-06-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110579607A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高月花;于志君;東野傳現(xiàn);亓麗紅;宋敏訓(xùn);胡峰;李玉峰;于可響
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所(山東省無(wú)特定病原雞研究中心)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種FADV A病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，用于FADV A病毒抗體的快速檢測(cè)。本發(fā)明所述FADV A病毒間接ELISA檢測(cè)試劑盒，以表達(dá)蛋白fiber2為包被抗原，由于表達(dá)的特異性蛋白對(duì)于FADV A的特異性高，安全性好，且不含無(wú)關(guān)雜蛋白，能與FADV A陽(yáng)性血清進(jìn)行特異結(jié)合，且不與其它病毒的陽(yáng)性血清發(fā)生交叉反應(yīng)，具有良好的抗原性，是理想的ELISA檢測(cè)抗體的包被抗原載體，使得制得檢測(cè)試劑盒具有很高的特異性和敏感性，在禽腺病毒A型的檢測(cè)工作中發(fā)揮重要作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種FADV A病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，用于FADV A病毒抗體的快速檢測(cè)。

背景技術(shù)

禽腺病毒(Fowl adenovirus，F(xiàn)AdV)是禽體內(nèi)的一種條件性病原體，一般情況下并不表現(xiàn)出臨床癥狀，但在某些條件下，特別是并發(fā)感染時(shí)，腺病毒會(huì)表現(xiàn)嚴(yán)重的致病性，引起家禽較高發(fā)病率和死亡率。自2015年在山東、江蘇、湖北等地大規(guī)模爆發(fā)禽Ⅰ群腺病毒以來(lái)，此后逐漸向全國(guó)各地蔓延，給全國(guó)的養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

禽腺病毒Ⅰ群主要分為5個(gè)基因型(A型-E型)，以及12個(gè)血清型(1-7,8a,8b,9-11型),這些基因型均普遍存在于家禽體內(nèi)。病禽可以同時(shí)感染多個(gè)血清型，也可以在擁有某個(gè)血清型病毒抗體的同時(shí)還可以排出另外一個(gè)血清型的病毒。禽腺病毒Ⅰ群病毒呈現(xiàn)世界性分布，常導(dǎo)致各個(gè)年齡段的家禽均易感染。其中，F(xiàn)ADV A型多會(huì)引起病禽的沙囊糜爛，大多情況下病毒在禽體內(nèi)復(fù)制但不致病，或只是引起較輕微的癥狀，但當(dāng)有免疫抑制病或發(fā)生混合感染時(shí)，則會(huì)加劇病情的惡化，嚴(yán)重影響禽群健康。目前，隨著養(yǎng)禽業(yè)逐漸呈現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化、集約化和規(guī)模化的發(fā)展趨勢(shì)，隨之對(duì)禽腺病毒病的防控提出了更高的要求，也對(duì)如何評(píng)價(jià)禽腺病毒病的主動(dòng)免疫產(chǎn)生的免疫抗體的性能和效果提出了新的要求。

現(xiàn)有技術(shù)中，禽腺病毒A型常用的血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要包括中和試驗(yàn)、瓊擴(kuò)試驗(yàn)等，中和試驗(yàn)因操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、周期較長(zhǎng)等缺陷，通常不利于批量樣品的檢測(cè)。ELISA檢測(cè)是當(dāng)前生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的一種抗體檢測(cè)方法，具有特異、快速、簡(jiǎn)便、敏感性高等特點(diǎn)。目前，國(guó)外已建立了使用不同血清型毒株作為包被抗原以檢測(cè)禽腺病毒抗體的ELISA方法并研制成標(biāo)準(zhǔn)的試劑盒，但由于價(jià)格昂貴，并未得到廣泛的應(yīng)用。纖突蛋白f2是腺病毒的表面蛋白，在介導(dǎo)病毒感染宿主細(xì)胞中起重要作用，能有效刺激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生。因此，研發(fā)一種成本較低、特異性及敏感性高、適合基層應(yīng)用的ELISA檢測(cè)試劑盒具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供FADV A病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，以實(shí)現(xiàn)FADV A病毒抗體的快速檢測(cè)。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了表達(dá)蛋白fiber2用于制備FADV A病毒間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的用途，所述表達(dá)蛋白fiber2具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種所述的FADV A間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，包括以FADV A表達(dá)蛋白fiber2包被的ELISA板。

進(jìn)一步的，所述表達(dá)蛋白fiber2包被的ELISA板的制備方法為：用pH9.6的0.05M碳酸鹽緩沖液作包被液，將所述合成多肽W8稀釋至濃度為1μg/mL，按100μL/孔劑量加入至ELISA反應(yīng)板中，于37℃下作用2小時(shí)，并于4℃包被過(guò)夜，拍干后用T20blocking buffer于37℃封閉2小時(shí)，以pH7.4、含濃度0.05％吐溫-20的PBS進(jìn)行洗滌，拍干并待其干燥后裝入含干燥劑的包裝袋保存，備用。

更優(yōu)的，所述試劑盒還包括樣品稀釋液、10×濃縮洗滌液、酶結(jié)合物工作液、顯色液、終止液、陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

所述的FADV A間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括：