[發明專利]一種FADV A病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810584756.3
• 申請日: 2018-06-08
• 公開（公告）號: CN110579607A
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 高月花;于志君;東野傳現;亓麗紅;宋敏訓;胡峰;李玉峰;于可響
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院家禽研究所(山東省無特定病原雞研究中心)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.表達蛋白fiber2用于制備FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒的用途，所述表達蛋白fiber2具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

2.一種FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，包括以FADVA表達蛋白fiber2包被的ELISA板。

3.根據權利要求2所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述表達蛋白fiber2包被的ELISA板的制備方法為：用pH9.6的0.05M碳酸鹽緩沖液作包被液，將所述表達蛋白fiber2稀釋至濃度為1μg/mL，按100μL/孔劑量加入至ELISA反應板中，于37℃下作用2小時，并于4℃包被過夜，拍干后用T20blocking buffer于37℃封閉2小時，以pH7.4、含濃度0.05％吐溫-20的PBS進行洗滌，拍干并待其干燥后裝入含干燥劑的包裝袋保存，備用。

4.根據權利要求2或3所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括樣品稀釋液、10×濃縮洗滌液、酶結合物工作液、顯色液、終止液、陽性對照和陰性對照。

5.根據權利要求4所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

6.根據權利要求4或5所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：

所述樣品稀釋液為含濃度0.05％吐溫-20的0.01M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4；

所述10×濃縮洗液為含濃度0.5％吐溫-20的0.1M的磷酸鹽緩沖液，pH7.4；

所述酶結合物工作液為HRP-羊抗雞IgG；

所述顯色液為體積比1：1的濃度0.2mg/mL四甲基聯苯胺(TMB)溶液和含濃度0.5‰過氧化氫尿素的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液的混合液；

所述終止液為濃度0.31％氫氟酸溶液；

所述陽性對照為經篩選獲得的FADVA陽性血清，其OD_650nm≥1.0，并加入1000U/mL的青鏈霉素；

所述陰性對照為經篩選獲得的陰性血清，其OD_650nm≤0.25，并加入1000U/mL的青鏈霉素。

7.權利要求2-6任一項所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括將待檢血清加入至所述表達蛋白fiber2包被的ELISA板的步驟。

8.權利要求7所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，具體包括：將待檢血清用所述樣品稀釋液按1：100比例進行稀釋，隨后按100μL/孔劑量加入至所述ELISA板中，同時設陰性對照及陽性對照，于37℃孵育45min；反應結束后，棄去反應孔中的液體，每孔加洗滌液350μL，洗滌3-5次，每次間隔1min，拍干；隨后每孔加100μL所述酶結合物工作液，于37℃孵育45min；隨后加洗滌液洗滌3-5次，每次間隔1min，拍干；并依次加入100μL顯色液，于37℃避光孵育15min，并加50μL終止液終止反應，用酶標儀在650nm波長下測定各孔吸光度A值，讀值計算并判定結果。

9.權利要求2-6任一項所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒在FADVA抗體的檢測領域中的應用。

10.一種快速檢測FADVA病毒抗體的方法，其特征在于，包括以權利要求2-6任一項所述的FADVA病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒對待測血清進行檢測的步驟，其檢測樣本的判斷標準為：當待檢樣本OD_650nm值與陰性對照OD_650nm值的比值(P/N)大于或等于2.1，且待檢樣本OD_650nm值大于0.333判為陽性。