[發明專利]靶向于TF的抗體-藥物偶聯物及其制法和用途

有效

• 申請號: 201810582697.6
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN110575547B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 沈競康;余科;孟韜;馬蘭萍;張永良;王昕;張學賽;陳驎;于霆
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海藥物研究所;復旦大學
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68;A61P35/00;A61P37/02;A61P29/00;C07K16/28
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 胡丹;徐迅

本發明描述了抗組織因子(TF)的抗體藥物偶聯體，所采用的通過一類新型雙取代馬來酰亞胺連接子將強細胞毒活性物質和生物大分子進行偶聯。該類連接子可選擇性與二硫鏈同時作用，從而大大提高偶聯物的物質均一性。本發明的連接子所制備的偶聯物對于表達TF抗原的細胞株具有高抑制活性。此外，本發明還提供了上述偶聯物的制備方法和用途。

技術領域

本發明涉及藥物領域，更具體地，涉及靶向于組織因子(TF)的抗體-藥物偶聯物的及其制備方法和用途。

背景技術

組織因子(Tissue factor，TF)是一個47kDa的跨膜糖蛋白。正常生理狀態下TF表達主要屏蔽于血管內皮下細胞層，一旦機體血管受到創傷，TF暴露于血流，通過結合并激活VII因子從而啟動外源性凝血反應。研究發現，TF在眾多腫瘤組織中異常激活表達，在腫瘤的發生和發展過程中起著重要作用。特別是在癌癥晚期，病人大多伴隨自發性血栓，如深度靜脈血栓(Deep-vein thrombosis，DVT)、彌漫性血管內凝血(Disseminatedintravascular coagulation，DIC)和肺栓塞(Pulmonary embolism，PE)等。TF在腫瘤細胞中的異常表達則是這些癥狀發生的主要誘因。對眾多腫瘤臨床樣本分析表明，TF的表達水平直接影響腫瘤的轉移、病人血栓的發生等惡化指標，如在乳腺癌中TF異常表達率為85.8％，在胰腺癌中為88.5％，在肺癌中為83.6％，食道癌中為91.3％等。研究表明，首先，TF與FVII形成TF-FVIIa復合物,能直接結合并誘導跨膜G蛋白偶聯受體Protease-activated receptor 2(PAR2)的活化。PAR2是調控炎癥反應的重要信號通路，雖然對PAR2在腫瘤領域的研究目前還比較少，但可以想象，TF通過PAR2能影響細胞內一系列腫瘤功能信號。如TF-FVIIa-PAR2通過MAPK/ERK磷酸化，誘導關鍵生長因子、免疫調節因子和趨化因子的基因表達(如VEGF、CSF1/2、IL8、CXCL1等)，促進新生血管的形成，為腫瘤的生長提供了充足的養分、能量和適宜的微環境。其次，TF還可以通過與Rac1、β1家族相關整合素的相互作用，以提高腫瘤細胞的遷移性和粘附性，從而在整體上增強腫瘤細胞的血行轉移能力。再次，TF起始的凝血作用也是腫瘤性血栓發生的重要誘因，導致多種癌癥惡化。同時，TF-誘導的高凝狀態又直接有助于腫瘤細胞逃離機體免疫系統的攻擊，并增加了腫瘤細胞與內皮細胞的相互作用，導致腫瘤細胞的血行轉移能力的提高，這也正是當前癌癥難治療的重要原因。

如上所述，TF在腫瘤發生發展過程中起著重要作用。而本發明人前期研究也發現與正常組織相比，TF在腫瘤組織中異常激活表達，尤其是在高侵襲、高轉移的基底樣和/或三陰性乳腺癌和胰腺癌，并且與其他靶點相比，靶向TF的抗體可被快速大量的內化，可見TF可能是一個更為優選的抗體-藥物偶聯物(antibody-drug conjugate，ADC)開發靶點。然而，目前尚缺乏高特異性的針對人TF的抗體藥物偶聯物。

抗體藥物偶聯物一般由三部分組成：抗體或抗體類配體，小分子藥物，和將配體與藥物偶聯起來的連接子。目前進入臨床試驗的抗體藥物偶聯物結構中，高活性的細胞毒性藥物通常是通過連接子連接在配體表面的賴氨酸殘基，或者抗體鉸鏈區域的半胱氨酸殘基(由鏈間二硫鍵部分還原得到)上，最佳的藥物/配體比值(DAR)為2-4。抗體表面大量的賴氨酸殘基(超過80個)以及偶聯反應的非選擇性，導致偶聯數目和位點的不確定性，進而導致生成的抗體藥物偶聯物的不均一性。例如，T-DM1(平均DAR值為3.5)的DAR值分布為0-8。同樣，盡管抗體鉸鏈區的鏈間二硫鍵只有四對，但為達到最佳平均DAR值(2-4)的要求，需要部分還原鏈間二硫鍵。由于現有的還原劑(DTT，TCEP等)無法選擇性地還原鏈間二硫鍵，因此生成的偶聯物也不是均一的產物，由多種組分組成，其主要組分的DAR值為0,2,4,6,8，而且對應每一種特定DAR值的組分都存在由于連接位點不同而形成的異構體。抗體藥物偶聯物產品的不均一性可以導致各成員組分間藥物動力學性質，效價以及毒性的不均一性。例如，具有較高DAR值的組分在體內被清除得更快，并導致更高的毒性。