[發(fā)明專利]一種牦牛源輪狀病毒重組VP6蛋白抗原與應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810582665.6
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108690126A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發(fā)明（設計）人: 湯承;岳華;羅雪;王遠微
• 申請（專利權）人: 西南民族大學
• 主分類號: C07K14/14
• 分類號: C07K14/14;C12N15/70;C12N15/46;G01N33/68;G01N33/543;A61K39/15;A61P31/14;A61P1/12
• 代理公司: 成都天匯致遠知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 51264
• 代理人: 韓曉銀

本發(fā)明公開了一種牦牛源輪狀病毒重組VP6蛋白抗原與應用。本發(fā)明的牦牛源輪狀病毒重組VP6蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；重組VP6蛋白具有良好的抗原性和免疫原性，能夠在原核系統(tǒng)中高效表達，本發(fā)明的間接ELISA檢測方法優(yōu)于商品化檢測試劑盒，為我國BRV抗體檢測和血清流行病學調查提供了一種快速、簡便、實惠的診斷方法，它解決了目前對犢牛輪狀病毒腹瀉的診斷方法存在著費時、費力、生物試劑和儀器設備昂貴的弊端。同時本發(fā)明的亞單位疫苗在小鼠中具有良好的保護效果，可用于預防由BRV引起的腹瀉。

技術領域

本發(fā)明屬于基因工程技術領域，具體地說，涉及一種牦牛源輪狀病毒重組VP6蛋白抗原與應用。

背景技術

牛輪狀病毒(Bovine Rotavirus，BRV)，又名牛流行性腹瀉，屬呼腸孤病毒科，輪狀病毒屬，主要引起犢牛腹瀉。國內于1974年首次發(fā)現(xiàn)該病，其臨床特征主要是噴射狀水瀉。牛輪狀病毒主要通過糞-口途徑傳播，一般10～100個病毒粒子即可引發(fā)感染，因此，快速、準確的診斷對確定病原體、有效的預防和控制疾病傳播具有重要的意義。

牛輪狀病毒常用檢測方法主要有病毒分離、電鏡觀察、聚丙烯酰氨凝膠電泳、酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)、聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術、環(huán)介導等溫擴增技術、分子探針技術、基因芯片技術等方法，其中以PCR技術和ELISA使用最為廣泛。PCR技術和ELISA均有操作簡單、特異性好、靈敏度高，無需昂貴儀器等優(yōu)點，但在用于大量樣本的檢測時，ELISA更加方便，耗時更短。

輪狀病毒為無囊膜的雙鏈RNA病毒，基因組由11個基因節(jié)段構成，分別編碼6種結構蛋白(Viral Protein,VP；VP1、VP2、VP3、VP4、VP6、VP7)和6種非結構蛋白(Non-structural Protein,NSP；NSP1～NSP6)。病毒的毒力和基因型由外衣殼蛋白VP4和VP7決定。VP6為內衣殼蛋白，含有病毒組和亞組特異性決定簇，其基因序列是11個基因節(jié)段中最保守的，全長約1356bp，編碼397個氨基酸，其氨基酸序列在不同血清型或基因型間同源性>70％，因此VP6成為多種檢測方法的首選靶基因。