[發明專利]一種特異性檢測煙曲霉的引物探針組合和基于熒光PCR法檢測煙曲霉的試劑盒

在審

• 申請號: 201810582569.1
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108707691A
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發明（設計）人: 方園;任云;歐陽云
• 申請（專利權）人: 杭州締藍生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/68
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

1.一種特異性檢測煙曲霉的引物探針組合，所述引物包括上游引物和下游引物，其特征在于，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探針的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根據權利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述探針的5’端修飾有熒光基團，同時3’端修飾有熒光猝滅基團。

3.根據權利要求2所述的引物探針組合，其特征在于，所述熒光基團包括FAM、SYBRGreen I、JOE、VIC、NED、CY-3、TEXAS Red或CY-5。

4.根據權利要求2或3所述的引物探針組合，其特征在于，所述熒光猝滅基團包括TAMRA或BHQ1。

5.一種基于熒光PCR法檢測煙曲霉的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：權利要求1～4任意一項所述引物探針組合、陰性對照、陽性對照和PCR反應液。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述引物探針組合中上游引物、下游引物的工作濃度獨立為8～12μmol/L。

7.根據權利要求5或6所述的試劑盒，其特征在于，所述引物探針組合中探針的工作濃度為8～12μmol/L。

8.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照包括含煙曲霉陽性對照DNA片段的質粒，所述煙曲霉陽性對照DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

9.根據權利要求5所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液包括以下含量的組分：400～500μmol/L的dNTP、0.1～0.2U/μL的Taq DNA聚合酶、0.1～0.2U/μL的尿嘧啶-N-糖基化酶、0.1～0.25μmol/L的參比熒光ROX、3～6mmol/L的MgCl₂和緩沖液；所述緩沖液包括10～20mmol/L的Tris-HCl、100～200mmol/L的KCl，所述Tris-HCl的pH值為8。

10.根據權利要求5或9所述的試劑盒，其特征在于，每20μL反應體系包括：10μL PCR反應液、0.5μL的上游引物、0.5μL的下游引物、0.5μL的探針、4.5μL水和4μL待檢測樣品DNA溶液。