[發明專利]一種高親和力的PD-1膜外區突變體的融合蛋白及其藥物組合物和用途

有效

• 申請號: 201810582025.5
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108752460B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 趙健;魏化偉;黃亞杰
• 申請（專利權）人: 江蘇東抗生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/705
• 分類號: C07K14/705;C07K19/00;C12N15/63;G01N33/68;A61K38/17;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京慧尚知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11743
• 代理人: 吉海蓮

本發明公開了一種高親和力的PD?1膜外區突變體，所述PD?1膜外區突變體包含選自SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5的氨基酸序列。本發明進一步提供了所述高親和力的PD?1膜外區突變體的融合蛋白及其應用。本發明創造性的合成了高親和力的PD?1膜外區突變體或其融合蛋白，所述融合蛋白與野生型PD?1相比具有更高的結合人PD?L1或PD?L2的親和力、更大的效力。本發明的融合蛋白為腫瘤的免疫治療提供了更加廣闊的途徑。

技術領域

本發明涉及腫瘤治療和分子免疫學領域，涉及一種高親和力的PD-1膜外區突變體的融合蛋白及其藥物組合物和用途。

背景技術

腫瘤的免疫治療是以激發和增強機體的免疫功能，以達到控制和殺滅腫瘤細胞的目的，腫瘤免疫療法是當前腫瘤治療領域中熱點之一，臨床試驗中也取得了顯著的治療效果。PD-1及其配體PD-L1/L2介導了對T細胞的抑制“耗竭”以及誘導免疫耐受的作用，腫瘤細胞表面高表達的PD-L1/L2與PD-1相互作用導致腫瘤細胞的免疫逃逸，因此抑制PD1～PD-L1/L2信號通路，重新激活被抑制的免疫系統成為最近免疫治療的熱點。

程序性死亡受體1(PD-1，也稱PDCD1和CD279)，由日本京都大學本庶佑(HonjoTasuku)教授于1992年發現。PD-1分為胞外區、跨膜區和胞質區三個部分，含有288個氨基酸的蛋白，分子量約為50～55kD。胞外區含一個IgV樣結構域，是與PD-1的配體結合并進而誘導免疫應答功能的區域，該區域含有4個N糖基化位點；胞質區含有1個ITIM(Immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，也即免疫受體酪氨酸抑制基序)，和1個ITSM(Immunoreceptor tyrosine-based switch motif，也即免疫受體酪氨酸轉化基序)，其中，ITSM的激活與效應性T細胞免疫應答密切相關。PD-1主要表達于活化的T細胞、B細胞及髓系細胞上，主要在維持T細胞耗竭中發揮重要作用，具有抑制T細胞的效應功能,因而慢性病原體和腫瘤細胞利用PD-1通路逃避免疫應答。

PD-L1蛋白：華裔科學家陳列平教授于1999年發現B7-H1，該蛋白隨后在2000年被證實能夠特異性結合PD-1，并命名為PD-L1，即程序性死亡分子配體-1(programmed deathligand 1,也稱CD274和B7-H1)；PD-L1分為胞外區、跨膜區疏水區和胞質區三個部分，由290個氨基酸亞基組成；其中胞外區包含兩個免疫球蛋白恒定區IgC和IgV樣結構域，胞質區是由30個氨基酸組成。PD-L1主要表達于成熟的CD4⁺、CD8⁺ T細胞、B細胞、樹突狀細胞等造血細胞；同時PD-L1常常高表達于多種腫瘤細胞表面，如黑色素瘤、非小細胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、頭頸部鱗狀細胞癌等，同時，腫瘤細胞PD-L1的高表達與腫瘤患者較差的預后、腫瘤的復發有關，并且與腫瘤大小、淋巴結受累、分級、總生存期也相關。

PD-L2蛋白：PD-1的另一個配體PD-L2即程序性死亡分子配體-2(programmeddeath ligand2,也稱CD273和B7-DC)是2001年被發現，PD-L2由274個氨基酸殘基組成的跨膜蛋白，PD-L2與PD-L1有很高的相似性，PD-L2與PD-1相互作用能夠抑制T細胞的增殖、細胞因子的產生和T細胞溶解作用，但PD-L2與PD-1的親和力是PD-L1的2～6倍。PD-L2在巨噬細胞、樹突狀細胞和一些B細胞亞類的膜表面表達，同時多種方法檢測到PD-L2在腫瘤細胞中的表達，而其中一些樣本中并未檢測到PD-L1的表達。因此能夠同時高效阻斷PD-1～PD-L1以及PD-1～PD-L2的藥物有待進一步開放。

2005年，日本小野制藥和美國Medarex制藥共同合作開發PD-1抗體藥物Nivolumab，并于2009年被百時美施貴寶收入囊中。2009年默沙東收購先靈葆雅，獲得PD-1抗體藥物Pembrolizumab的后續開發權。2014年，百時美施貴寶的Nivolumab和默沙東的Pembrolizumab相繼獲得上市批準。