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[發明專利]基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒有效

專利信息
申請號: 201810580404.0 申請日: 2018-06-07
公開(公告)號: CN108728528B 公開(公告)日: 2021-08-24
發明(設計)人: 劉必成;周樂汀;雷向東 申請(專利權)人: 東南大學;上海境象生物科技有限公司
主分類號: C12Q1/6883 分類號: C12Q1/6883
代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 代理人: 孫斌
地址: 211102 江*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 基于 taqman 探針 腎小管 上皮細胞 特異性 基因 檢測 熒光 定量 pcr 一步法 試劑盒
【權利要求書】:

1.一種基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒,其特征在于,包括檢測BBOX1基因的上下游引物及探針,其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1-3所示;檢測B2M內參基因的上下游引物及探針,其核苷酸序列如SEQ ID NO. 4-6所示。

2.根據權利要求1所述的基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括PCR酶混合液和MasterMix。

3.根據權利要求2所述的基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒,其特征在于,所述PCR酶混合液為m-mlv 逆轉錄酶和RNase inhibitor混合液。

4.根據權利要求1所述的基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒,其特征在于,所述BBOX1和B2M基因的探針連接的熒光基團為FAM-BHQ 1。

5.根據權利要求1-4任一所述的基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒,其特征在于,所述探針5’端標記的熒光報告基團是FAM,3’端連接淬滅基團。

6.根據權利要求4所述的基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒,其特征在于,所述BHQ 1為非熒光淬滅基團。

7.一種權利要求1所述的基于Taqman探針的腎小管上皮細胞特異性基因檢測熒光定量PCR一步法試劑盒在制備檢測基因BBOX1和B2M試劑中的應用。

8.根據權利要求7所述的應用,其特征在于,所述檢測基因時PCR反應體系為10ul,包括提取的樣本RNA 1ul,上下游引物和探針混合液3.5ul,PCR酶混合液0.5ul,MasterMix 5ul。

9.根據權利要求8所述的應用,其特征在于,所述檢測基因時熒光定量PCR反應條件為:42℃ 5min;95 ℃ 10min;95℃ 20s, 60℃退火/延伸45s,循環45次;40℃冷卻30 s。

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