[發明專利]一種基于FRET的PCR均相檢測系統及其應用

在審

• 申請號: 201810580151.7
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108715888A
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發明（設計）人: 王衛東;鐘京;毛赟赟;李京勵
• 申請（專利權）人: 王衛東
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 周建軍

本發明提供一種基于FRET的PCR均相檢測系統及其應用，該PCR均相檢測系，包括至少一個熒光或淬滅標記的連接標簽序列的加尾引物，即可以啟動DNA合成的引物；與標簽序列互補的淬滅或熒光標記的寡核苷酸序列，以及反向擴增引物。本發明通過熒光定量PCR儀器可以及時觀察信號，并在反應結束時立刻得到結果。

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，特別是涉及一種基于FRET的PCR均相檢測系統及其應用。

背景技術

SNP檢測是目前檢測需求最多的一種基因檢測。SNP分型方法可謂千姿百態，但隨著新技術、新方法與儀器的不斷出現，有些方法已經不再使用，或者僅僅用來做輔助性驗證，有些方法很高大上，但不適合大范圍使用。

單核苷酸多態性是指基因組上單個堿基的改變造成的DNA序列的多態性。主要是是指轉換與顛換，也包括極少的插入或缺失。SNP是遺傳變異中最常見的，占已知多態性的90％以上，在人類基因組中廣泛存在。由于其分布廣，穩定遺傳的特點，許多疾病易感性或藥物反應差異都與其緊密相關，所以，目前越來越多地應用到分子診斷、新藥開發、個體化用藥、臨床檢驗等方面。

Taqman探針法，僅靠退火溫度競爭一種機制來分型，Arms探針法不能實時熒光檢測。

美國專利US 7615620 B2公開了一種PCR檢測系統，其中Kasp法檢測SNP位點需要7條寡核苷酸，并且主要是終點SNP分型，不適用于實時熒光SNP分型。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種基于FRET的PCR均相檢測系統及其應用，用于解決現有技術中Kasp法檢測SNP位點需要7條寡核苷酸，并且主要是終點SNP分型，不適用于實時熒光SNP分型等問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明第一方面提供一種基于FRET的PCR均相檢測系統，包括至少一個熒光或淬滅標記的連接有標簽序列的加尾引物，即可以啟動DNA合成的引物；與所述標簽序列互補的淬滅或熒光標記的寡核苷酸序列，以及反向擴增引物。

在本發明的一些實施例中，所述標簽序列的長度為9-125bp。

在本發明的一些實施例中，所述寡核苷酸序列長度為9-125bp。

在本發明的一些實施例中，所述標簽序列與所述寡核苷酸序列的互補方式包括正向互補、反向互補。

在本發明的一些實施例中，熒光或淬滅基團的標記位置為所述標簽序列的任意堿基位置，加尾引物上的標記基團與寡核苷酸序列上的標記基團相互靠近。

在本發明的一些實施例中，熒光標記基團選自FAM、、TET、HEX、VIC、JOE、TAMRA、ROX、TEXAS-RED、CY3、CY5等中的至少一種。與前述基團具有類似發射波長的熒光基團均適用于本發明。

在本發明的一些實施例中，淬滅標記基團選自BHQ0、BHQ1、BHQ2、BHQ3、TAMRA、MGB、DABCYL、ECLIPSE等與之類似吸收波長的淬滅基團中的至少一種。與前述基團具有類似發射波長的熒光基團均適用于本發明。

在本發明的一些實施例中，所述加尾引物為兩個，其中一個加尾引物中含有如下標簽序列：TGGACTACCATAGATGTGCTGC(SEQ ID NO.6)，另一個加尾引物中含有如下標簽序列：ACTTCACCGGTCTGGCGGGTTCA(SEQ ID NO.7)。標簽序列即為加尾序列。標簽序列不限于前述兩個序列，根據待檢測基因的不同，也可以設計為其他標簽序列。

在本發明的一些實施例中，所述熒光標記的連接有標簽序列的加尾引物包括G-F1-25、A-F1-25，所述G-F1-25的核苷酸序列如下所示：