[發(fā)明專利]一種基于FRET的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810580151.7
• 申請(qǐng)日: 2018-06-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108715888A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王衛(wèi)東;鐘京;毛赟赟;李京勵(lì)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 王衛(wèi)東
• 主分類號(hào): C12Q1/6858
• 分類號(hào): C12Q1/6858
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 周建軍

1.一種基于FRET的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)，包括至少一個(gè)熒光或淬滅標(biāo)記的連接有標(biāo)簽序列的加尾引物，與標(biāo)簽序列互補(bǔ)的淬滅或熒光標(biāo)記的寡核苷酸序列，以及反向擴(kuò)增引物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于：所述標(biāo)簽序列的長(zhǎng)度為9-125bp。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于：所述標(biāo)簽序列與所述寡核苷酸序列的互補(bǔ)方式包括正向互補(bǔ)、反向互補(bǔ)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于：熒光標(biāo)記基團(tuán)選自FAM、TET、HEX、VIC、JOE、TAMRA、ROX、TEXAS-RED、CY3、CY5中的至少一種；淬滅標(biāo)記基團(tuán)選自BHQ0、BHQ1、BHQ2、BHQ3、TAMRA、MGB、DABCYL、ECLIPSE中的至少一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于：熒光或淬滅基團(tuán)的標(biāo)記位置為所述標(biāo)簽序列的任意堿基位置，加尾引物上的標(biāo)記基團(tuán)與所述寡核苷酸序列上的標(biāo)記基團(tuán)相互靠近。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于，所述加尾引物為兩個(gè)，其中一個(gè)加尾引物中含有如下標(biāo)簽序列：TGGACTACCATAGATGTGCTGC(SEQ ID NO.6)，另一個(gè)加尾引物中含有如下標(biāo)簽序列：ACTTCACCGGTCTGGCGGGTTCA(SEQ ID NO.7)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)，其特征在于，所述熒光標(biāo)記的連接標(biāo)簽序列的加尾引物序列包括G-F1-25、A-F1-25，所述G-F1-25的核苷酸序列如下所示：

5’-FAM-TGGACTACCATAGATGTGCTGCACTATTTTCTTGACCCCTACTTACG-3’(SEQ ID NO.1)；

所述A-F1-25的核苷酸序列如下所示：

5’-HEX-ACTTCACCGGTCTGGCGGGTTCAACTATTTTCTTGACCCCTACTTACA-3’

(SEQ ID NO.2)；

所述淬滅標(biāo)記的連接標(biāo)簽序列的加尾引物序列包括淬滅F、淬滅H，所述淬滅F的核苷酸序列如下所示：

5’-GCAGCACATCTATGGTAGTCCA-BHQ1-3’(SEQ ID NO.3)；

所述淬滅H的核苷酸序列如下所示：

5’-TGAACCCGCCAGACCGGTGAAGT-BHQ1-3’(SEQ ID NO.4)；

所述反向擴(kuò)增引物的核苷酸序列如下所示：

TAGTAGACAACATACGACCAC(SEQ ID NO.5)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述PCR均相檢測(cè)系統(tǒng)在單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)中的應(yīng)用。