[發明專利]一種藍莓花青素的高效提取方法

在審

• 申請號: 201810580149.X
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108558815A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 李鵬;許多
• 申請（專利權）人: 盛林藍莓集團股份有限公司
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62;C09B61/00;C09B67/54
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙) 34124
• 代理人: 王志興

1.一種藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)選材

選取表面完整，且無腐爛跡象的藍莓果；

(2)制備米曲霉發酵大米產物

取優質大米42-48份，清水洗凈，加水侵泡至大米達到無硬芯，再將侵泡好的大米放入電飯鍋中煮至一定程度，然后將煮熟的大米分裝至容器，接種米曲霉并混勻，再置于33-35℃、90％以上濕度條件下發酵3-3.5天；

取發酵3-3.5天后的大米放入容器中，再加入其質量16-17％的磷酸緩沖液，均質4-5min后，3900-4100r/min下離心6-8min，取上清液備用；

(3)原料預處理

對步驟(1)中的藍莓果進行液氮速凍處理，并快速將藍莓搗碎，然后加入其質量12-14％的步驟(2)所得上清液，混合均勻，15-25min后用冷凍干燥機在-80℃冷凍干燥，制得藍莓干粉；

(4)酶解破壁

將步驟(3)所得的藍莓干粉轉移至酶解罐，并向酶解罐加入復合生物酶溶液，酶解時間為7-11h，酶解溫度為32-38℃，最終得花青素充分釋放的藍莓酶解物；

其中，復合生物酶溶液的具體配制方法為：首先，向水中加入檸檬酸，然后，用氫氧化鈉調節pH至4.2-4.4，加入酸性纖維素酶、酸性蔗糖酶和單寧酶，混合均勻，得生物復合酶溶液；

(5)藍莓花青素提取

將濃度為45-65％、pH值為3-5的乙醇與步驟(4)所得的藍莓酶解物以(5-7)：1的重量比例混合，加熱回流提取1-2h，過濾并收集濾液和殘渣，殘渣再以相同的料液比與同濃度的酸化乙醇溶液混合，再次回流提取1-2h，過濾并收集濾液，合并兩次的濾液；

(6)除雜

將步驟(5)所得合并濾液于0-4℃低溫下放置15-19h，然后過濾；

(7)濃縮與超濾

先將步驟(6)所得濾液在51-55℃下減壓蒸發濃縮9-13h，再將濃縮液通過微孔濾膜進行超濾處理，以除去細菌和大分子蛋白；

(8)柱層析純化

先將濾液以每小時1-3倍柱體積的速度流過大孔吸附樹脂，然后用2-5倍柱體積的蒸餾水以相同的速度流過樹脂，洗去大部分雜質，再用1-3柱體積的60-90％的乙醇溶液以相同速度流過樹脂，將樹脂上吸附的花色苷洗脫下來，收集洗脫液；

(9)干燥

將洗脫液在52-54℃下減壓蒸發濃縮以進一步除去乙醇，最后在40-55℃真空環境中干燥；

(10)檢測

采用高效液相色譜法對純化后的藍莓花青素中的花色苷含量進行檢測。

2.根據權利要求1所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述步驟(2)中一定程度指電飯鍋中煮至大米熟而不粘。

3.根據權利要求1所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述步驟(2)中米曲霉的接種量為2-4％。

4.根據權利要求3所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述米曲霉的接種量具體為3％。

5.根據權利要求1所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述步驟(2)中磷酸緩沖液的pH為6.5-7.5。

6.根據權利要求1所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述步驟(3)中液氮的溫度為(-30)-(-50)℃，流量為4-5m/s。

7.根據權利要求1所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述步驟(3)中制得的藍莓干粉中的水分低于5％。

8.根據權利要求1所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述步驟(4)中生物復合酶溶液中，酸性纖維素酶、酸性蔗糖酶和單寧酶的酶活性均為100IU。

9.根據權利要求1所述的藍莓花青素的高效提取方法，其特征在于，所述步驟(10)中檢測出的花色苷含量45％以上。