[發(fā)明專利]乙酰化戊型肝炎病毒衣殼蛋白ORF2及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810580101.9
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108752435B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王佑春;許楠;黃維金;趙晨燕;張黎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C12N15/86;C12N5/10;A61K38/16;A61K39/29;A61P1/16;A61P31/14
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

本發(fā)明涉及乙酰化戊型肝炎病毒ORF2蛋白、和增加該乙酰化ORF2蛋白生產(chǎn)的方法和細(xì)胞培養(yǎng)物。本發(fā)明還涉及該乙酰化ORF2蛋白用于促進(jìn)ORF2多聚化和/或病毒樣顆粒組裝的用途。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和病毒學(xué)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及乙酰化戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)衣殼蛋白ORF2，和調(diào)節(jié)戊型肝炎病毒ORF2多肽的乙酰化水平的方法。本發(fā)明還涉及HDAC6的抑制劑在改善ORF2多肽穩(wěn)定性、HEV病毒形成、HEV病毒復(fù)制和HEV病毒樣顆粒形成中的用途。本發(fā)明也涉及通過改變細(xì)胞中HEV ORF2的乙酰化水平來治療HEV病毒感染的方法。

背景技術(shù)

戊型肝炎病毒(HEV)在全球范圍內(nèi)感染人和動物，引起腸道傳播的病毒性肝炎，在孕婦中致死率達(dá)到25％。1989年報(bào)道了來自腸道傳播的非A非B肝炎患者的戊型肝炎病毒序列，該序列類似于從豬、兔、大鼠、鹿和野豬中分離的序列。HEV的衣殼蛋白ORF2是該病毒的主要抗原，特異性結(jié)合HEV基因組RNA的5’末端，在病毒感染及組裝和病毒基因組完整性的維持上具有重要作用。然而，對于HEV感染細(xì)胞中ORF2多肽穩(wěn)定性和病毒包涵體(IB)形成的調(diào)節(jié)，目前所知甚少。

戊型肝炎病毒(HEV)，作為無包膜病毒，含有7.2kb單股正鏈RNA，其編碼三種蛋白ORF1，ORF2和ORF3(1)。現(xiàn)存在四種主要的HEV基因型，每年在全球引起大約2000萬人感染，包括3.3百萬癥狀性戊型肝炎病例和56600戊型肝炎引起的死亡(2,3)。1和2基因型HEV主要感染人并在發(fā)展中國家造成流行性爆發(fā)，基因型3和4在發(fā)展中和發(fā)達(dá)國家中具有人畜共患性。

ORF2是HEV的主要抗原，包含660個氨基酸殘基，在病毒感染中起主要作用，可誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答(5)。截短的ORF2(aa112-660)片段能夠自組裝成病毒樣顆粒(VLP)(6)。ORF2VLP可與天然病毒誘導(dǎo)相同免疫原性途徑，已經(jīng)在研究和疫苗生產(chǎn)中用于模擬HEV(7,8)。同時(shí)，HEV ORF2也能夠結(jié)合HEV基因組RNA的5’末端，在病毒組裝和基因組完整性的維持上起作用(9)。ORF2的N端信號序列在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)中共翻譯，并在ER中實(shí)現(xiàn)N-連接糖基化修飾(10)。此外，ORF2的C端52個氨基酸殘基也參與HEV包裝和衣殼顆粒的穩(wěn)定化(11)。盡管ORF2在HEV生命周期中非常重要，但是其在宿主中如何被調(diào)節(jié)仍未明。

賴氨酸乙酰化是一種重要的翻譯后修飾(PTM)，由賴氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶動態(tài)催化，并由賴氨酸去乙酰化酶去除。賴氨酸的乙酰化涉及病毒生命周期的多種關(guān)鍵事件，包括染色質(zhì)重塑、基因表達(dá)和蛋白質(zhì)穩(wěn)定性調(diào)節(jié)，細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和病毒的裂解-潛伏轉(zhuǎn)化(13)。HDAC6是IIb類HDAC酶家族成員，對例如α-微管蛋白,HSP90和p300等非組蛋白進(jìn)行去乙酰化(14-17)。HDAC6在調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)、粘著和遷移、錯誤折疊蛋白的降解和應(yīng)激反應(yīng)、腫瘤細(xì)胞侵襲、血管發(fā)生、以及藥物抗性中有重要作用(18-30)。近來的研究顯示，HDAC6也在病毒感染和發(fā)病機(jī)理中起重要作用(13)。然而，HDAC6似乎具有雙重作用(13)。一方面，HDAC6參與抗病毒感染的宿主防御(31-35)。另一方面，HDAC6被病毒利用，幫助病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞或病毒RNA合成(36-38)。迄今為止，病毒中僅HIV-1 Tat蛋白已經(jīng)鑒定為HDAC6底物(35)。

考慮到目前戊型肝炎對人類健康的嚴(yán)重危害且近年來發(fā)病率呈迅速上升趨勢，因此，目前仍需要改善HEV病毒疫苗生產(chǎn)和治療HEV病毒感染的新方法。經(jīng)過深入的研究，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，HEV利用宿主的翻譯后修飾系統(tǒng)來維持HEV衣殼蛋白ORF2穩(wěn)定性和包涵體(IB)形成的新機(jī)制。基于此發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人提出了通過靶向調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞中ORF2的乙酰化水平來改善HEV疫苗生產(chǎn)和治療HEV感染的新方法和新組合物。

發(fā)明概述