[發(fā)明專利]乙酰化戊型肝炎病毒衣殼蛋白ORF2及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810580101.9
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108752435B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王佑春;許楠;黃維金;趙晨燕;張黎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C12N15/86;C12N5/10;A61K38/16;A61K39/29;A61P1/16;A61P31/14
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.一種分離的乙酰化戊型肝炎病毒開放閱讀框2(HEV ORF2)多肽，其特征在于所述乙酰化ORF2多肽包含肽序列E(P/L)TVK⁴¹¹LYTSVEN，并在K411位具有乙酰化，且

其中所述多肽由基因型1或4的HEV ORF2蛋白的aa112至aa660的氨基酸序列組成，

其中該分離的乙酰化ORF2多肽為至少95％純度。

2.權(quán)利要求1的分離的乙酰化HEV ORF2多肽，其中所述多肽由選自SEQ ID NO:2或4的序列組成。

3.一種增加權(quán)利要求1或2中定義的乙酰化HEV ORF2多肽產(chǎn)生的方法，包括：

-提供包含抑制HDAC6表達(dá)的核酸分子的HDAC6敲低細(xì)胞，

-用HEV病毒感染所述細(xì)胞，或向所述細(xì)胞中引入表達(dá)所述ORF2多肽的重組表達(dá)構(gòu)建體，

-培養(yǎng)細(xì)胞以產(chǎn)生所述乙酰化HEV ORF2多肽，

其中，相對于HDAC6表達(dá)未被敲低的對照細(xì)胞，K411乙酰化ORF2多肽在細(xì)胞中的產(chǎn)量增加。

4.權(quán)利要求3的方法，其中，步驟(a)的細(xì)胞包含抑制HDAC6表達(dá)的siRNA或shRNA或其表達(dá)構(gòu)建體。

5.權(quán)利要求3的方法，其中所述細(xì)胞是HDAC6組成型敲低細(xì)胞或HDAC6條件性敲低細(xì)胞。

6.一種增加權(quán)利要求1或2中定義的乙酰化HEV ORF2多肽產(chǎn)生的方法，包括：

-用HEV病毒感染細(xì)胞，或向細(xì)胞引入表達(dá)所述ORF2多肽的重組表達(dá)構(gòu)建體，

-向所述細(xì)胞施加HDAC6化學(xué)抑制劑以抑制HDAC6活性，

-培養(yǎng)細(xì)胞以生產(chǎn)所述乙酰化ORF2多肽，

其中相對于HDAC6活性未被抑制的對照細(xì)胞，K411乙酰化ORF2多肽在細(xì)胞中的產(chǎn)量增加。

7.權(quán)利要求6的方法，其中HDAC6化學(xué)抑制劑選自以下的非選擇性抑制劑：TSA、Vorinostat,LBH589,ITF2357,PXD-101，或選自以下的HDAC6選擇性抑制劑：rocilinostat(ACY-1215)，ACY-241，Tubacin，Tubastatin A(TBSA)，CAY10603，Nexturastat A，HPOB，ACY-738，ACY-775,和ACY-1083，或其組合。

8.權(quán)利要求7的方法，其中使用選自以下的HDAC6抑制劑處理細(xì)胞：

(a)濃度0.2μM-5μM的Trichostatin A(TSA)，

(b)濃度1μM-10μM的Tubastatin A(TBSA)，

(c)濃度0.1μM-1μM的CAY10603。

9.權(quán)利要求8的方法，其中使用1μM的Trichostatin A(TSA)處理細(xì)胞。

10.權(quán)利要求8的方法，其中使用6μM的Tubastatin A(TBSA)處理細(xì)胞。

11.權(quán)利要求8的方法，其中使用0.2μM的CAY10603處理細(xì)胞。

12.權(quán)利要求3-11任一項的方法，其中收集產(chǎn)生的乙酰化HEV ORF2多肽、或該K411乙酰化HEV ORF2多肽與未乙酰化ORF2多肽的混合物。

13.一種用于生產(chǎn)權(quán)利要求1或2中定義的K411乙酰化ORF2多肽的細(xì)胞培養(yǎng)物，其包含HDAC6敲低的細(xì)胞，且所述細(xì)胞包含編碼所述ORF2多肽的核酸。

14.權(quán)利要求13的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述HDAC6敲低的細(xì)胞被HEV病毒感染。