[發(fā)明專利]與白肋煙控制基因共分離的分子標記及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810579942.8
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108707690B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳新儒;劉貫山;張興偉;龔達平;薄韶云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;陳曉慶

本發(fā)明公開了與白肋煙控制基因共分離的分子標記及其應(yīng)用。本發(fā)明從EMS誘變的普通煙草中鑒定了一個葉綠素代謝缺陷的白莖突變體，研究表明該突變體的兩個隱性控制基因與白肋煙的白莖基因等位，隨后對兩個基因進行了圖位克隆，并在此基礎(chǔ)上開發(fā)了兩個基因的特異分子標記。通過實驗證明：本發(fā)明的方法和分子標記可以簡單、快速、準確地檢測兩個基因的基因型，有助于在分子水平上加深對白肋煙的認識，借此加快煙草育種的進程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及與白肋煙控制基因共分離的分子標記及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

葉綠素是綠色植物葉綠體內(nèi)參與光合作用的重要色素，在光合作用的能量捕獲及能量傳遞中起著關(guān)鍵的作用。葉綠素的正常代謝被破壞后，植物葉片往往出現(xiàn)白化、黃化、淡綠、深綠等異常的表型(Kurata et al.2005)。過去，很多葉色突變體曾被認為不利于植物的生長發(fā)育而在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上毫無用處。不過，隨著科技的進步和相關(guān)研究的深入挖掘，一些突變體逐漸表現(xiàn)出了較大的應(yīng)用潛力。例如，棉花的芽黃突變體和水稻的白轉(zhuǎn)綠突變體由于對農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)均無顯著影響，可以作為指示雜交種純度的有效形態(tài)標記(Duncan and Pate 1967；Wu et al.2003)；硬粒小麥的持綠突變體由于延遲了葉綠素的降解而延長了光合作用的時間，從而提高了籽粒的產(chǎn)量(Spano et al.2003)；白茶突變體由于在階段性返白期葉片氨基酸含量的提高和組分的變化而成為制作高檔茶葉的理想原料(李素芳et al.1996)。

白肋煙是普通煙草的一種缺綠突變體，作為一種獨特的煙草栽培類型，其葉片大而薄，彈性強，組織疏松，填充性好，吸收能力強，在卷煙工業(yè)中具有較高的使用價值。近年來，由于人們對健康的關(guān)注，安全性高的低焦油卷煙受到追捧，白肋煙焦油含量低，香吃味好，是低焦油混合型卷煙的主要原料。另外白肋煙在野生煙草向栽培煙草轉(zhuǎn)移抗病基因方面起著關(guān)鍵的橋梁親本的作用。因此，白肋煙在煙草育種上具有重要的應(yīng)用價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的是提供一種鑒定或輔助鑒定待測煙草是否為白肋煙的方法。

本發(fā)明提供的鑒定或輔助鑒定待測煙草是否為白肋煙的方法包括如下步驟(1)和(2)：

(1)檢測待測煙草含有WS1A基因還是ws1a基因還是含有WS1A基因和ws1a基因；

(2)檢測待測煙草含有WS1B基因還是ws1b基因還是含有WS1B基因和ws1b基因；

若待測煙草含有ws1a基因和ws1b基因，且不含有WS1A基因和WS1B基因，則待測煙草為或候選為白肋煙；否則待測煙草不為或候選不為白肋煙；

所述ws1b基因的核苷酸序列為序列1；

所述ws1a基因的核苷酸序列為序列2；

所述WS1A基因的核苷酸序列為序列3；

所述WS1B基因的核苷酸序列為序列4。

進一步的，所述(1)中，所述檢測待測煙草含有WS1A基因還是ws1a基因還是含有WS1A基因和ws1a基因的方法包括如下步驟：采用引物對A對待測煙草進行PCR擴增，根據(jù)PCR產(chǎn)物判斷待測煙草含有WS1A基因還是ws1a基因還是含有WS1A基因和ws1a基因；

若擴增產(chǎn)物大小為209bp，則待測煙草含有WS1A基因；

若擴增產(chǎn)物大小為201bp，則待測煙草含有ws1a基因；

若擴增產(chǎn)物大小為209bp和201bp，則待測煙草含有WS1A基因和ws1a基因；

所述引物對A由序列7所示的單鏈DNA分子和序列8所示的單鏈DNA分子組成；