[發明專利]一種基于多巴胺修飾的三元量子點的間接免疫熒光檢測疾病標志物的方法

有效

• 申請號: 201810577449.2
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108761061B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 韓志鐘;陳麗;陳敬華;李春艷
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發明公開一種基于多巴胺修飾的三元量子點的間接免疫熒光檢測疾病標志物的方法，首先，酪氨酸酶（TYR）通過無銅點擊反應與疾病生物標志物的檢測抗體結合。另外，將生物素修飾的相應適配體與親和素包被的96孔板結合，依次加入疾病生物標志物和TYR?檢測抗體。在將過量的TYR?檢測抗體洗滌后加入CuInS₂/ZnS QDs?DA。在疾病生物標志物存在下，TYR能催化氧化CuInS₂/ZnS QDs?DA中的多巴胺部分使其轉化為多巴胺醌導致熒光猝滅。通過檢測TYR催化氧化CuInS₂/ZnS QDs?DA反應引起的電子轉移導致的熒光信號的變化，實現對疾病生物標志物的高靈敏檢測。

技術領域

本發明涉及光學和生化工程領域，特別涉及一種基于多巴胺修飾的三元量子點CuInS₂/ZnS 用于檢測疾病生物標志物的間接熒光免疫傳感技術的構建及應用。

背景技術

疾病生物標志物是指可以標記系統、器官、組織、細胞及亞細胞結構或功能因疾病而發生改變或可能發生改變的生化指標，可用于作為疾病的診斷、鑒別診斷、療效評價、疾病分期、疾病風險評估、預后估計以及健康評價等的輔助性指標。近年來，疾病生物標志物的常規檢測方法主要包括儀器分析法和酶聯免疫吸附法（ELISA）。其中，儀器分析法由于設備昂貴、操作復雜等缺點無法大面積推廣使用。而常規的 ELISA 檢測方法操作流程簡單，現階段已成為實驗室診斷的常規手段，但其靈敏度和穩定性容易受到眾多因素的干擾，影響結果的均一性和準確性。因此間接的熒光免疫傳感技術因其高靈敏性，高選擇性和高效性，在檢測疾病標志物中引起了越來越多的關注。

半導體量子點（QDs）具有獨特的光學性質，如高亮度、高量子產率、抗漂白性、穩定性、長熒光壽命、寬的吸收光譜及窄的光致發光（PL）發射光譜，使其成為生物分子診斷及醫學診斷的有力工具。近年來，三元量子點因其熒光發射光譜不僅具有尺寸可調性，同時具有組分可調性，這使其在醫學領域中具有更廣闊的應用前景。

常規的熒光免疫檢測通過量子點與相應的抗體結合檢測熒光信號變化，但是量子點與抗體結合所需的復雜修飾過程是其關鍵的障礙，對疾病標志物的檢測的靈敏度有待提高。通過將氧化還原物質多巴胺（DA）修飾的三元量子點應用于熒光傳感技術中，用酪氨酸酶代替量子點與抗體綴合來實現免疫識別，催化多巴胺氧化為多巴胺醌改變量子點的熒光信號。本發明避免了量子點與抗體結合的復雜修飾過程，提高了檢測的靈敏度。

通過間接熒光免疫傳感技術，使用高熒光的多巴胺官能化的三元量子點 CuInS₂/ZnS 可實現對特定疾病生物標志物的高靈敏度和高效的檢測，并有望推廣應用于疾病的診斷及新藥的篩選工作中，因而本發明具有巨大的潛在應用價值和深遠的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于多巴胺修飾的三元量子點 CuInS₂/ZnS 的間接熒光免疫傳感技術的構建方法，用于疾病生物標志物的高靈敏、高特異性檢測。

本發明的目的是這樣實現的，一種多巴胺功能化的三元量子點 CuInS₂/ZnS 的制備方法，包括如下步驟：

1）三元量子點 CuInS₂/ZnS 的制備

（1）儲備液的制備：將 0.0034 g 氯化銅溶解于 20 mL 去離子水中獲得0.01 M銅儲備溶液；將 1.106 g三氯化銦溶解在 5 mL 乙醇中制備 1 M 銦儲備溶液；將 2.3528g 檸檬酸鈉溶解于 20 mL 去離子水中獲得 0.4 M 檸檬酸鈉儲備溶液；將 2.408 g 硫化鈉溶解于 10 mL 去離子水中制備 1 M Na₂S 儲備溶液；將 0.176 g 醋酸鋅，0.061 g 硫脲和 0.368 g L-谷胱甘肽溶解于 20 mL 去離子水中，用 1 M NaOH 水溶液將 pH 值調節至 5.5?6.6，獲得 0.04 M ZnS 殼儲備溶液；將上述所有制備的儲備溶液在室溫中儲存并在兩周內使用；