[發明專利]一種檢測模塊及方法

有效

• 申請號: 201810576135.0
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號: CN108823288B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 許文濤;羅云波;苗苗;杜再慧;田晶晶;梁志宏;黃昆侖
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/682
• 分類號: C12Q1/682
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種檢測模塊及方法。本發明基于EXPAR串聯消解型HCR建立了一種檢測模塊及方法。當待檢測物中含有靶標物質時，通過本發明建立的用于EXPAR反應的模塊和方法擴增形成大量的消解單鏈，實現靶標物質的檢測信號的放大，然后再將形成的大量消解單鏈用于消解本發明改造的消解型HCR產物，實現靶標物質檢測信號的轉換。在一個具體的實施方式中，本發明通過對HCR中使用的發夾結構進行改造，對超分子雙鏈串聯體改造升級，使核酸發夾不僅可以自組裝成DNA雙鏈，同時還可以被核酸單鏈高效消解。實現信號的雙重感應。在一個具體的實施方式中，將本發明設計改造的消解型發卡序列、消解序列應用于實際檢測時，檢測的靈敏度高，最低能檢測到1nM的X底物。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測技術領域，具體涉及一種檢測模塊及方法。

背景技術

食品安全風險因子來源上大致可以分為生物源安全風險因子和非生物源性安全風險因子。生物源安全風險因子較為典型的如食源性致病菌和在致毒機制研究中具有重要生物學意義的microRNA；非生物源性食品安全風險因子如環境中的重金屬。除此之外，食品安全風險因子種類繁多，不同種類風險因子間的聯系愈發緊密，但目前想實現不同類型的風險因子的同時檢測，還是一個技術難題。傳統的檢測方法依賴于大型的儀器設備或者免疫分析法等，通常耗時且不能進行現場檢測。而一些生物學檢測往往對于被檢測的靶物質選擇性較高，且同樣很少可以通用性檢測。

發明內容

本發明提供了一種檢測模塊及方法。本發明基于EXPAR(ExponentialAmplification Reaction，EXPAR)串聯消解型HCR(Hybridization chain reaction，HCR)建立了一種檢測模塊及方法。當待檢測物中含有靶標物質時，通過本發明建立的用于EXPAR反應的模塊和方法擴增形成大量的消解單鏈，實現靶標物質的檢測信號的放大，然后再將形成的大量消解單鏈用于消解本發明改造的消解型HCR產物，實現靶標物質檢測信號的轉換。如果靶標物質為核酸序列，則以該核酸序列的部分或全部作為EXPAR反應的引物序列，如果靶標物質是非核酸物質如金屬離子，則可先通過金屬核酶將金屬離子轉化為核酸序列信號，例如，當待測物中含有待測金屬離子時，金屬核酶被激活，切割模板序列，釋放待檢測的目標靶序列，然后將該目標靶序列作為EXPAR反應的引物序列，實現后續的檢測。本發明建立的一種基于EXPAR串聯消解型HCR的檢測模塊及方法，為生物源安全風險因子和非生物源性安全風險因子的通用檢測提供了一個新的通用平臺，豐富了現有檢測技術和方法，為新的檢測產品或方法的研發提供了一個新的平臺和思路。

本發明的一個目的是提供一種檢測模塊，所述模塊包括發卡型核酸序列1、發卡型核酸序列2和促發子核酸序列：

所述發卡型核酸序列1從5’端到3’端依次包括序列a、b、c、d、b’；

所述發卡型核酸序列2從5’端到3’端依次包括序列b’、a’、e、b、d’；

所述促發子核酸序列從5’端到3’端依次包括序列b’、a’；

所述b與b’的核酸序列反向互補雜交，所述a與a’的核酸序列反向互補雜交，所述d與d’的核酸序列反向互補雜交，所述c、e包括核苷酸個數為1個以上的任意核酸序列。

具體的，所述模塊包括下述1)-3)所述中的至少一種：

1)所述c、e包括核苷酸個數為15個的任意核酸序列；具體的，所述c為5’-AAAAAAAAAAAAAAA-3’；所述e為5’-GGGGGGGGGGGGGGG-3’；

2)所述b、b’的核苷酸個數為18個；

3)所述a、a’、d、d’的核苷酸個數為6個。

具體的，所述模塊包括下述1)-3)所述中的至少一種：