[發明專利]一種同時檢測禽白血病病毒抗體和雞白痢沙門氏菌抗體的試劑盒

有效

• 申請號: 201810575755.2
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號: CN108709995B
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 鄭世軍;王永強;游廣炬;李曉齊;曹紅
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎;趙青朵

本發明涉及動物疫病檢測技術領域，特別涉及一種同時檢測禽白血病病毒抗體和雞白痢沙門氏菌抗體的試劑盒。該試劑盒包括：p27蛋白、GroEL?Δ8?1蛋白、酶標記的第二抗體、BSA、包被液、封閉液、顯色液和終止液。本發明用禽白血病病毒保守區p27的原核表達蛋白和雞白痢沙門氏菌優勢抗原GroEL的截短體GroEL?Δ8?1的原核表達蛋白為包被抗原開發出能夠同時檢測禽白血病病毒抗體和雞白痢沙門氏菌抗體的間接ELISA試劑盒，本發明的試劑盒能夠同時檢測禽白血病和雞白痢，只要檢測為陽性的雞即淘汰，達到同時凈化的目的，極大地減輕臨床檢測凈化的工作。

技術領域

本發明涉及動物疫病檢測技術領域，特別涉及一種同時檢測禽白血病病毒抗體和雞白痢沙門氏菌抗體的試劑盒。

背景技術

禽白血病(Avian Leukosis)是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)和禽肉瘤病病毒(Avian Sarcoma Virus,ASV)群中的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統稱。該病對雞能引起許多種具有傳染性的良性和惡性腫瘤。自1868年Roloff報道雞淋巴肉瘤以來，禽白血病已分布于世界各地，我國也有自然病例發生。該病可引起雞只增重緩慢、性成熟延遲、蛋小、蛋殼薄、產蛋量下降、受精率和孵化率低、胴體廢棄率增加、死亡率增高等，造成直接經濟損失。同時還可引起機體非特異性抵抗力下降和免疫抑制，造成間接經濟損失。由于該病能垂直傳播，因此對養禽業危害很大，是危害養雞業的主要疾病之一。

雞白痢(Pullorum Disease)是由雞白痢沙門氏菌(Salmonella pullorum,SP)引起的，以雛雞為主要感染對象，以排白色糞便和產蛋下降為主要特征，可致產前各日齡雞敗血性傷寒癥的禽類急性傳染病。雞白痢沙門氏菌的傳播方式呈多樣性，不僅可通過飼料、空氣、飲水、鼠類等進行水平傳播，也可通過產帶菌卵進行垂直傳播，孵化出的病雛絨毛中攜帶的大量病原菌，可污染飲水、育雛器、飼料等，通過消化道、呼吸道等感染同雞舍的幼雛，耐過雞只成年后再排帶菌卵，由此形成復雜的傳播網絡。雞白痢沙門氏菌在國內感染率高，分布廣，是種禽養殖凈化的重點，也是商品蛋雞養殖重點防治的疾病。

禽白血病和雞白痢都是可以垂直傳播的傳染病，對養雞業造成嚴重的危害。目前控制禽白血病和雞白痢最有效的措施是實施傳染病的凈化，主要通過定期對種雞群進行檢疫，淘汰陽性雞，通過不斷地凈化從而選育出無禽白血病和雞白痢的雞群。各國在眾多檢測方法中，ELISA檢測方法以其敏感、特異、操作方便而被廣泛應用于臨床檢測。該法適合于基層獸醫部門和雞場對該病的診斷和血清學檢測。

禽白血病病毒的p27基因是禽白血病病毒不同亞群之間的一段高度保守的基因。其編碼的p27蛋白是病毒核心外殼的主要成分，其含量高，占病毒總蛋白成分的30％以上，能夠誘導機體產生特異性抗體。Heat-shock protein 60(GroEL)是雞白痢沙門氏菌重要的蛋白抗原，在雞白痢沙門氏菌入侵機體時可誘導產生大量抗體。因此，可以用p27和GroEL作為包被抗原，建立檢測禽白血病和雞白痢抗體的間接ELISA檢測試劑盒。目前主要的禽白血病和雞白痢檢測試劑盒種類如表1所示：

表1禽白血病和雞白痢檢測試劑盒統計

禽白血病和雞白痢都是養雞場需要凈化的傳染病，目前對禽白血病的凈化主要是用國外ELISA試劑盒檢測雞泄殖腔拭子的禽白血病病毒抗原p27和雞血清的禽白血病抗體，對雞白痢的凈化主要用平板凝集試驗檢測雞血清的雞白痢沙門氏菌抗體，這些試劑盒或方法都是針對單一傳染病的檢測，還沒有一種單一試劑盒能夠檢測禽白血病和雞白痢這兩種病。單獨檢測禽白血病的試劑盒和平板凝集試驗單獨檢測雞白痢的方法，使臨床檢測凈化禽白血病和雞白痢工作耗費大量的人力、物力和財力。因此迫切需要研制出方便好用的禽白血病和雞白痢檢測試劑盒，減輕禽白血病和雞白痢的凈化工作。

發明內容