[發明專利]一種降低煙葉特有亞硝胺的復合酶制劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810574550.2
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號: CN108823190B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 米其利;高茜;夭建華;劉巍;管瑩;陸舍銘;李雪梅;徐玉瓊;錢穎穎;朱洲海
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N9/18;C12N9/26;C12N9/88;C12N9/24;C12N9/42;C12N9/34;C12N9/20;A24B3/12
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 金耀生;亢能

本發明涉及一種降低煙葉特有亞硝胺的復合酶制劑及其制備方法和應用，該復合酶制劑由中性蛋白酶、果膠酶、木聚糖酶、糖化酶、β?葡聚糖酶、α?淀粉酶、中溫淀粉酶、纖維素酶、中性脂肪酶和煙草復合酶中的5種或5種以上，以及無菌蒸餾水組成。經過本發明的復合酶制劑的處理，曬黃煙調制煙葉中TSNAs含量降低了26.40%?36.81%。本發明成本低，操作方便，易于大規模推廣應用，提升煙葉的質量安全，在煙葉原料降害方面具有很大的應用價值。

技術領域

本發明涉及一種復合酶制劑，尤其是一種降低煙葉特有亞硝胺的復合酶制劑，還涉及其制備方法和應用，屬于煙葉加工領域。

背景技術

利用現代生物技術降解煙葉有害成分及其前體物質是卷煙減害的重要途徑。近年來，隨著人們對吸煙與健康關系的日益重視，煙草中的煙草特有亞硝胺（Tobacco-specificnitrosamines，簡稱TSNAs）因其潛在的致癌能力而備受關注，成為煙草公司降低煙草危害性的重要研究內容之一。TSNAs主要包括4種有害物質：N-亞硝基去甲基煙堿（簡稱NNN）、4-(N-甲基-亞硝基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮（簡稱NNK）、N-亞硝基假木賊堿（簡稱NAB）和N-亞硝基新煙草堿（簡稱NAT），大量研究證明TSNAs形成的主要前體物質有煙葉中的氮氧化物、硝酸鹽和亞硝酸鹽等。新鮮煙葉中幾乎不含TSNAs，煙葉TSNAs是在煙葉采收后的調制和貯藏等過程中形成的，因此調制期是控制TSNAs形成的關鍵環節之一。

目前，國內外降低TSNAs含量的技術覆蓋了品種選育、煙株田間管理、調制、醇化和儲藏等從種子到煙葉加工的各個環節。在調制和醇化過程中，微生物菌劑是主要的控制煙葉TSNAs含量的生物技術。例如：祝明亮等將分離自白肋煙的6株反硝化細菌處理白肋煙煙葉，調制后煙葉TSNA量降低了27.56%-99.88%（微生物學報, 2004, 44(4):422-426）；汪安云等將分離自白肋煙煙葉的根瘤土壤桿菌噴施于白肋煙煙葉經晾制后可顯著降低煙葉TSNAs的含量，比同一時期對照煙葉中TSNA含量降低了81.3%（環境科學學報, 2006, 26(11): 1914-1920）；專利03810579.9采用分離自白萊煙煙葉的可降解TSNAs的少動鞘氨醇單胞菌和/或熒光假單胞菌處理白萊煙煙葉從而降低煙葉TSNAs量；專利03135607.9將分離自煙草的內生細菌銅綠假單胞菌KenLXP30處理白肋煙煙葉顯著降低煙葉TSNAs量；專利03135608.7將放射根瘤菌KenLXR34處理白肋煙煙葉顯著降低煙葉TSNAs量；專利201110090798.X采用分離自烤煙煙葉的惡臭假單胞菌T2-2菌懸液處理烤煙煙葉，煙葉TSNAs中的NNN和NNK分別降低了28.33%和57.83%。然而，微生物菌劑在煙葉TSNAs含量控制中的應用存在以下幾個方面的局限性：（1）微生物菌劑的發酵和制備工藝需要經過大量試驗參數的反復優化，此外發酵和制備過程也耗時耗力；（2）微生物菌劑的制備成本較高；（3）微生物在煙葉上的定植能力和生長代謝活性，及環境條件等對其功能發揮影響較大，以上問題在不同程度上限制了微生物菌劑在TSNAs含量控制中的大規模推廣應用。

酶具有靶標選擇性強、催化效率高、作用條件溫和等特點，利用酶處理改善煙葉及煙梗等從而提高其內在品質取得了較多研究成果。與烤煙的烘烤調制方式不同，曬黃煙主要采用在自然環境條件下的晾曬調制方式，調制時的自然環境條件有利于酶作用的發揮。利用酶處理調制期煙葉來降低煙葉調制過程中TSNAs含量的研究鮮見報道。

發明內容

為了克服現有技術問題的不足，本發明提供了一種降低煙葉特有亞硝胺的復合酶制劑，還提供其制備方法及應用，主要是通過噴施酶制劑的方式處理新鮮煙葉后進行煙葉的調制，從而降低調制煙葉中TSNAs的含量，提升煙葉的質量安全，為優質煙葉生產提供技術支持。本發明的技術方案如下：

一種降低煙葉特有亞硝胺的復合酶制劑，由中性蛋白酶、果膠酶、木聚糖酶、糖化酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶、中溫淀粉酶、纖維素酶、中性脂肪酶和煙草復合酶中的5種或5種以上，以及無菌蒸餾水組成，其中，各組分的質量百分比如下：