[發明專利]一種篩選蛋白混合物中活性多肽的方法

有效

• 申請號: 201810574116.4
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號: CN108872587B
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 萬江陵;盛劍勇;楊曉宇;楊祥良;劉衛;饒榮
• 申請（專利權）人: 華中科技大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07K1/04
• 代理公司: 11002 北京路浩知識產權代理有限公司
• 代理人: 王瑩;吳歡燕

1.一種篩選蛋白混合物中活性多肽的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)對蛋白混合物的二級質譜數據進行從頭測序；

2)根據步驟1)所得到的從頭測序結果中各多肽組分的相對強度、可信度、離子匹配情況及特定氨基酸含量，篩選出所述蛋白混合物中可能存在的活性組分；其中，所述特定氨基酸為所述蛋白混合物中的主要氨基酸；

3)將步驟2)得到的活性組分進行固相合成，得到多肽單體；

4)比較步驟3)得到的多肽單體的液質圖譜與所述蛋白混合物的液質圖譜，確定所述蛋白混合物中活性多肽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)具體為：

21)根據步驟1)所得到的從頭測序結果，篩選出相對強度或可信度從大到小排名10～15的多肽組分；

22)根據步驟21)中得到的多肽組分在所述從頭測序結果中的相對強度、可信度、離子匹配情況及特定氨基酸含量，篩選出所述蛋白混合物中可能存在的活性組分。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟22)具體為：根據步驟21)中得到的多肽組分在所述從頭測序結果中的相對強度、可信度、離子匹配情況及特定氨基酸含量，建立篩選打分方法，篩選出所述蛋白混合物中可能存在的活性組分；

所述篩選打分方法具體為：

對所述多肽組分在所述從頭測序結果中的相對強度取對數，對最大值和最小值分別賦予不同分值，將其它對數值與最大值或最小值進行對比，以獲得每種多肽組分的相對強度項分數；

對所述多肽組分在所述從頭測序結果中的可信度賦予不同分值，以獲得每種多肽組分的可信度項分數；

對所述多肽組分在所述從頭測序結果中的離子匹配情況賦予不同分值，以獲得每種多肽組分的離子匹配程度項分數；

將所述多肽組分中每種多肽組分中含有特定氨基酸殘基的個數除以總氨基酸殘基個數，對最大值和最小值分別賦予不同分值，將其它值與最大值或最小值進行對比，以獲得每種多肽組分的特定氨基酸含量項分數；

分別賦予相對強度項分數、可信度項分數、離子匹配程度項分數、特定氨基酸含量項分數以不同的權重，計算總得分。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，分別賦予相對強度項分數、可信度項分數、離子匹配程度項分數、特定氨基酸含量項分數以10～70％、10～30％、10～30％和10～30％的權重。

5.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟1)具體為：

將蛋白混合物中的二級質譜數據轉換為.raw格式的譜圖，使用pNovo 3.0軟件進行從頭測序分析，pBuild 2.0軟件生成從頭測序結果。

6.根據權利要求1至4中任一項所述的方法，其特征在于，所述蛋白混合物為核桃粕水解物。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述蛋白混合物為核桃粕水解物。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述核桃粕水解物的二級質譜數據使用液相色譜柱為C₁₈柱、質譜為ESI正離子模式的液質聯用系統采集得到。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述核桃粕水解物的二級質譜數據使用液相色譜柱為C₁₈柱、質譜為ESI正離子模式的液質聯用系統采集得到。

10.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述步驟1)從頭測序的參數設置如下：最大遺漏酶切位點為3；母離子誤差為±20ppm；碎片離子誤差為±20ppm；限定式搜索修飾為Fixed:Carbamidomethyl。

11.根據權利要求7-9任一項所述的方法，其特征在于，所述步驟1)從頭測序的參數設置如下：最大遺漏酶切位點為3；母離子誤差為±20ppm；碎片離子誤差為±20ppm；限定式搜索修飾為Fixed:Carbamidomethyl。