[發明專利]一種鑒別CCoVI和CCoVII的雙重納米PCR檢測方法有效
| 申請號： | 201810569666.7 | 申請日： | 2018-06-05 |
| 公開（公告）號： | CN108676917B | 公開（公告）日： | 2022-04-12 |
| 發明（設計）人： | 崔尚金;秦彤 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京市誠輝律師事務所 11430 | 代理人： | 梁婧文 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒別 ccovi ccovii 雙重 納米 pcr 檢測 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種非診斷目的的同時鑒別CCoVI和CCoVII的雙重納米PCR檢測方法，其特征在于，
1)抽提樣品RNA，并將RNA反轉錄為cDNA，獲得擴增模板；
2)配制反應體系如下：2×nano PCR Buffer，10μL；納米PCR引物CCoVⅠ-F、CCoVⅠ-R、CCoVⅡ-F和CCoVⅡ-R各1.0μL，引物濃度為10μM，擴增模板0.5-1μL；Taq DNA聚合酶2.5U；ddH2O加至20μL；
3)PCR反應條件為：95℃、3min；
95℃、30s，48℃、30s，72℃、30s，35個循環；
72℃、10min；
所述納米PCR引物由以下引物組成：
擴增CCoVI特異性片段的如SEQ ID NO.1所示引物CCoVⅠ-F和如SEQ ID NO.2所示引物CCoVⅠ-R；和，
擴增CCoVII特異性片段的如SEQ ID NO.3所示引物CCoVⅡ-F和如SEQ ID NO.4所示引物CCoVⅡ-R。
2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，還包括瓊脂糖凝膠檢測步驟。
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