[發(fā)明專利]一種用于多糖甲基化反應(yīng)的自動(dòng)化儀器及其使用方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810568694.7
• 申請(qǐng)日: 2018-06-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108676104A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-10-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊清平;陳星;沈秀婷;黃秋陽(yáng);徐婷婷;袁君;石瑩瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 淮陰工學(xué)院
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 淮安市科文知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 32223
• 代理人: 謝觀素

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于多糖甲基化反應(yīng)的自動(dòng)化儀器及其使用方法，包括設(shè)有三根注射器的自動(dòng)微量注射泵，其中的兩根注射器并聯(lián)接入第一錐形瓶?jī)?nèi)、剩余的一根注射器與第二錐形瓶連通，所述的第一、第二錐形瓶之間通過(guò)導(dǎo)管相互連通，所述第二錐形瓶上設(shè)有出氣口，第一錐形瓶上設(shè)有進(jìn)氣口，所述進(jìn)氣口與氮?dú)廨斔脱b置連通，還包括將第二錐形瓶?jī)?nèi)的液體吸入第一錐形瓶?jī)?nèi)的蠕動(dòng)泵，所述第一、第二錐形瓶、放置在磁力加熱攪拌器上，避免操作人員直接接觸有毒試劑碘甲烷，避免手工操作引起的人員誤差和在非密閉環(huán)境中可能的外來(lái)污染，提高了多糖甲基化反應(yīng)的準(zhǔn)確度和安全性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多糖結(jié)構(gòu)鑒定領(lǐng)域，具體涉及一種用于多糖甲基化反應(yīng)的自動(dòng)化儀器及其使用方法。

背景技術(shù)

越來(lái)越多的研究證明多糖具有復(fù)雜的多方面的生物活性和功能,特別是對(duì)機(jī)體免疫功能的作用。多糖不但能治療機(jī)體的免疫系統(tǒng)受到產(chǎn)重?fù)p傷的癌癥,又能治療多種免疫缺損疾病如慢性病毒性肝炎和某些耐藥細(xì)菌或病毒引起的慢性疾病,而且多糖作為藥物其細(xì)胞毒極小。因此，對(duì)多糖的結(jié)構(gòu)分析技術(shù)亟需探討研究。

多糖的結(jié)構(gòu)分析中的甲基化分析方法是分析多糖結(jié)構(gòu)必不可少的方法。多糖甲基化反應(yīng)方程式為：

甲基化分析方法的步驟是先將多糖(或配糖體中糖部分)中各種單糖殘基的游離羥基轉(zhuǎn)化為甲氧基,進(jìn)而酸水解成各種甲基化的單糖。迄今各國(guó)常用的甲基化仍然是以Hakomori法為基礎(chǔ)再加以改良。先將樣品溶解于無(wú)水二甲基亞砜中。可用超聲波或磁力攪拌加熱以加速溶解并使完全溶解于無(wú)水二甲基亞砜中,否則將導(dǎo)致不完全甲基化。樣品完全溶解于無(wú)水二甲基亞砜后,與甲基亞磺酰甲基鈉反應(yīng)。制備甲基亞磺酰甲基鈉時(shí)尤應(yīng)嚴(yán)格控制溫度,過(guò)高可加速分解,過(guò)低則反應(yīng)速度太慢,然后與碘甲烷反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束時(shí),必須將剩余碘甲烷除盡,以免影響下一步的還原反應(yīng)。

要使甲基化反應(yīng)完全,關(guān)鍵有兩點(diǎn):(1)樣品與試劑均應(yīng)干燥;(2)反應(yīng)要在氮?dú)鈮合逻M(jìn)行。反應(yīng)混合物經(jīng)上述步驟后,用自來(lái)水透析過(guò)夜(透析袋要經(jīng)預(yù)處理)。透析液或萃取液冷凍干燥或減壓濃縮至干,即得全甲基化樣品。全甲基化樣品經(jīng)IR分析在3500cm^-1附近無(wú)吸收峰，則多糖上羥基已完全甲基化。

目前進(jìn)行多糖甲基化反應(yīng)，操作復(fù)雜不便，耗時(shí)久，且碘甲烷試劑對(duì)人員有身體傷害，人工操作易引入人員誤差及環(huán)境所引起的試劑污染。這種情況使多糖的研究進(jìn)程帶來(lái)時(shí)間與精力的諸多損耗，故急需一種用于多糖甲基化反應(yīng)的自動(dòng)化儀器，以實(shí)現(xiàn)對(duì)多糖甲基化反應(yīng)的連續(xù)、準(zhǔn)確、安全的實(shí)驗(yàn)操作。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服現(xiàn)有缺陷提供一種用于多糖甲基化反應(yīng)的自動(dòng)化儀器及其使用方法，用微量注射泵自動(dòng)輸送反應(yīng)液至錐形瓶中，然后通過(guò)錐形瓶下的磁力加熱攪拌器，對(duì)反應(yīng)液進(jìn)行攪拌加熱；同時(shí)通過(guò)蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)移多糖反應(yīng)液，通過(guò)氮?dú)廨斔脱b置的氮?dú)怛?qū)盡瓶?jī)?nèi)空氣，通過(guò)組合一系列自動(dòng)化裝置，組成一個(gè)可以自動(dòng)連續(xù)操作的多糖甲基化反應(yīng)裝置，進(jìn)而得到甲基化多糖產(chǎn)物。

一種用于多糖甲基化反應(yīng)的連續(xù)操作過(guò)程的自動(dòng)化儀器，包括設(shè)有三根注射器的自動(dòng)微量注射泵，其中的兩根注射器并聯(lián)接入第一錐形瓶?jī)?nèi)、剩余的一根注射器與第二錐形瓶連通，所述的第一、第二錐形瓶之間通過(guò)導(dǎo)管相互連通，所述第二錐形瓶上設(shè)有出氣口，第一錐形瓶上設(shè)有進(jìn)氣口，所述進(jìn)氣口與氮?dú)廨斔脱b置連通，還包括將第二錐形瓶?jī)?nèi)的液體吸入第一錐形瓶?jī)?nèi)的蠕動(dòng)泵，所述第一、第二錐形瓶、放置在磁力加熱攪拌器上。

本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)方案是，所述第二錐形瓶的底部連通有出液管，所述出液管的出口與所述蠕動(dòng)泵的進(jìn)口連接，所述第一錐形瓶的瓶體上連通有進(jìn)液管，所述進(jìn)液管的進(jìn)口與所述蠕動(dòng)泵的出口相連。

本發(fā)明進(jìn)一步的改進(jìn)方案是，所述氮?dú)廨斔脱b置包括氮?dú)馄浚獨(dú)馄客ㄟ^(guò)導(dǎo)管與第一錐形瓶連通，所述導(dǎo)管上由前至后依次設(shè)有開(kāi)關(guān)閥、穩(wěn)壓閥、流量表，氮?dú)馄亢偷谝诲F形瓶之間的導(dǎo)管為設(shè)有球形干燥劑的導(dǎo)管，所述的球形干燥劑位于所述流量表的下游。