[發明專利]靶向EGFR的嵌合抗原受體及其用途

在審

• 申請號: 201810568227.4
• 申請日: 2018-06-05
• 公開（公告）號: CN110564749A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 金濤;王海鷹
• 申請（專利權）人: 上海恒潤達生生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種多核苷酸序列，所述多核苷酸序列選自：

(1)含有依次連接的抗EGFR單鏈抗體的編碼序列、人CD8α鉸鏈區的編碼序列、人CD8跨膜區的編碼序列、人41BB胞內區的編碼序列、人CD3ζ胞內區的編碼序列的多核苷酸序列；和

(2)(1)所述多核苷酸序列的互補序列。

2.如權利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，

在所述抗EGFR單鏈抗體的編碼序列前的所述信號肽的編碼序列如SEQ ID NO:1第1-63位核苷酸序列所示；和/或

所述抗EGFR單鏈抗體的輕鏈可變區的編碼序列如SEQ ID NO:1第64-411位核苷酸序列所示；和/或

所述抗EGFR單鏈抗體的重鏈可變區的編碼序列如SEQ ID NO:1第457-780位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD8α鉸鏈區的編碼序列如SEQ ID NO:1第781-921位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD8跨膜區的編碼序列如SEQ ID NO:1第922-987位核苷酸序列所示；和/或

所述人41BB胞內區的編碼序列如SEQ ID NO:1第988-1131位核苷酸序列所示；和/或

所述人CD3ζ胞內區的編碼序列如SEQ ID NO:1第1132-1464位核苷酸序列所示。

3.一種融合蛋白，所述融合蛋白選自：

(1)含有依次連接的抗EGFR單鏈抗體、人CD8α鉸鏈區、人CD8跨膜區、人41BB胞內區和人CD3ζ胞內區的融合蛋白和任選的EGFR的含胞外結構域III和胞外結構域IV的片段的編碼序列；和

(2)在(1)限定的氨基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且保留活化T細胞活性的由(1)衍生的融合蛋白；

優選地，所述抗EGFR單鏈抗體為抗EGFR單克隆抗體806。

4.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白具有以下一個或多個特征：

所述融合蛋白在所述抗EGFR單鏈抗體的N端還含有信號肽，優選地，所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-21位氨基酸所示；

所述抗EGFR單鏈抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第22-137位氨基酸所示；

所述抗EGFR單鏈抗體的重鏈可變區的氨基酸序列可如SEQ ID NO:2第153-260位氨基酸所示；

所述人CD8α鉸鏈區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第261-307位氨基酸所示；

所述人CD8跨膜區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第308-329位氨基酸所示；

所述人41BB胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第330-377位氨基酸所示；

所述人CD3ζ胞內區的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第378-488位氨基酸所示。

5.一種核酸構建物，所述核酸構建物含有權利要求1-2中任一項所述的多核苷酸序列；

優選地，所述核酸構建物為載體；

更優選地，所述核酸構建物為逆轉錄病毒載體，含有復制起始位點，3’LTR，5’LTR，以及權利要求1-2中任一項所述的多核苷酸序列。

6.一種逆轉錄病毒，所述逆轉錄病毒含有權利要求5所述的核酸構建物，優選含有所述載體，更優選含有所述逆轉錄病毒載體。

7.一種基因修飾的T細胞或含該基因修飾的T細胞的藥物組合物，其特征在于，所述細胞含有權利要求1-2中任一項所述的多核苷酸序列，或含有權利要求5所述的核酸構建物，或感染了權利要求6所述的逆轉錄病毒，或穩定表達權利要求3-4中任一項所述的融合蛋白的片段。

8.權利要求1-2中任一項所述的多核苷酸序列、權利要求3-4中任一項所述的融合蛋白、權利要求5所述的核酸構建物或權利要求6所述的逆轉錄病毒在制備活化的T細胞中的應用。

9.權利要求1-2中任一項所述的多核苷酸序列、權利要求3-4中任一項所述的融合蛋白、權利要求5所述的核酸構建物、權利要求6所述的逆轉錄病毒、或權利要求7所述的基因修飾的T細胞或其藥物組合物在制備治療EGFR介導的疾病的藥物中的用途；

優選地，所述EGFR介導的疾病為惡性腦膠質瘤。