[發明專利]檢測植物病原性輪枝菌的特異引物對、探針和試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810566515.6
• 申請日: 2018-06-05
• 公開（公告）號: CN108707688A
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發明（設計）人: 段維軍;郭立新;段麗君;陳先鋒
• 申請（專利權）人: 寧波檢驗檢疫科學技術研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 杭州云睿專利代理事務所(普通合伙) 33254
• 代理人: 張驍敏

1.一種特異引物對，其特征在于由引物VF和引物VR組成；

所述引物VF為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

所述引物VR為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子。

2.一種引物探針組，其特征在于包括權利要求1所述特異引物對和探針VP：

所述探針VP為如下(c1)或(c2)：

(c1)序列表的序列3；

(c2)與序列3相比進行了一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。

3.根據權利要求2所述引物探針組，其特征在于所述探針VP的一個末端具有熒光報告基團，另一個末端具有熒光淬滅基團。

4.權利要求1所述特異引物對或權利要求2或3所述引物探針組的應用，為如下(b1)、(b2)、(b3)或(b4)：

(b1)鑒定植物病原性輪枝菌；

(b2)制備用于鑒定植物病原性輪枝菌的試劑盒；

(b3)檢測待測樣本是否含有植物病原性輪枝菌；

(b4)制備用于檢測待測樣本是否含有植物病原性輪枝菌的試劑盒。

5.一種試劑盒，其特征在于包括權利要求1所述特異引物對或權利要求2或3所述引物探針組；所述試劑盒的功能為如下(b1)、(b3)：

(b1)鑒定植物病原性輪枝菌；

(b3)檢測待測樣本是否含有植物病原性輪枝菌。

6.一種鑒定待測菌是否為植物病原性輪枝菌的方法，其特征在于包括如下步驟：

以待測菌的基因組DNA為模板，采用權利要求2或3所述引物探針組進行實時熒光PCR并檢測熒光信號，如果熒光信號顯示符合陽性擴增曲線，則待測菌為或候選為植物病原性輪枝菌；如果熒光信號顯示不符合陽性擴增曲線，則待測菌為或候選為非植物病原性輪枝菌。

7.一種鑒定待測菌是否為植物病原性輪枝菌的方法，其特征在于包括如下步驟：

以待測菌的基因組DNA為模板，采用權利要求1所述特異引物對進行PCR擴增，如果產生特異擴增產物，則待測菌為或候選為植物病原性輪枝菌；如果不產生特異擴增產物，則待測菌為或候選為非植物病原性輪枝菌。

8.一種檢測待測樣本是否含有植物病原性輪枝菌的方法，其特征在于包括如下步驟：

以待測樣本的總DNA為模板，采用權利要求2或3所述引物探針組進行實時熒光PCR并檢測熒光信號，如果熒光信號顯示符合陽性擴增曲線，則待測樣本含有或疑似含有植物病原性輪枝菌；如果熒光信號顯示不符合陽性擴增曲線，則待測樣本不含有或疑似不含植物病原性輪枝菌。

9.一種檢測待測樣本是否含有植物病原性輪枝菌的方法，其特征在于包括如下步驟：

以待測樣本的總DNA為模板，采用權利要求1所述特異引物對進行PCR擴增，如果產生特異擴增產物，則待測樣本含有或疑似含有植物病原性輪枝菌；如果不產生特異擴增產物，則待測菌不含有或疑似不含有植物病原性輪枝菌。

10.一種檢測待測樣本是否含有植物病原性輪枝菌的方法，其特征在于包括如下步驟：

檢測待測樣本的總DNA中是否具有權利要求1所述特異引物對的靶序列，如果具有所述靶序列，待測樣本含有或疑似含有植物病原性輪枝菌；如果不具有所述靶序列，待測菌不含有或疑似不含有植物病原性輪枝菌。