[發(fā)明專利]對RNA分子進(jìn)行處理的方法及試劑盒和復(fù)合體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810565937.1
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN110551794B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 江媛;徐旭;章文蔚;席陽;汪為茂;趙霞;任悍;王歐
• 申請（專利權(quán)）人: 完整基因有限公司;深圳華大智造科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

1.一種對RNA分子進(jìn)行處理的方法，其特征在于，包括：

基于所述RNA分子，形成第一RNA-DNA復(fù)合體，所述第一RNA-DNA復(fù)合體包括：

雙鏈區(qū)，所述雙鏈區(qū)由匹配DNA單鏈和匹配RNA單鏈形成；

DNA單鏈區(qū)，所述DNA單鏈區(qū)與所述匹配DNA單鏈的5’末端相連；以及

RNA單鏈區(qū)，所述RNA單鏈區(qū)與所述匹配RNA單鏈的5’末端相連；

在所述匹配RNA單鏈的3’末端連接雙鏈DNA接頭，以便獲得第二RNA-DNA復(fù)合體，所述雙鏈DNA接頭具有平末端。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，利用T4連接酶在所述匹配RNA單鏈的3’末端連接所述雙鏈DNA接頭。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述雙鏈區(qū)上所述匹配DNA單鏈的3’末端含有封閉基團(tuán)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述封閉基團(tuán)包括選自3’磷酸，3’開環(huán)糖，3’氨基修飾，3’二脫氧核苷酸，3’硫代磷酸酯（PS）鍵或3’磷酸酯中的至少一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述3’開環(huán)糖為3’-磷酸-α，β-不飽和醛（PA）。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA分子的核酸長度大于等于10nt。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述雙鏈區(qū)的核酸長度大于等于6bp。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA單鏈區(qū)的核酸長度大于等于0nt。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA單鏈區(qū)的核酸長度大于等于1nt。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA分子選自小RNA、或者mRNA。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述小RNA包括SiRNA、miRNA、piRNA。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過將所述RNA分子與DNA探針接觸形成所述第一RNA-DNA復(fù)合體。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述DNA探針的3’末端含有封閉基團(tuán)。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述封閉基團(tuán)包括選自3’磷酸，3’開環(huán)糖，3’氨基修飾，3’二脫氧核苷酸，3’硫代磷酸酯（PS）鍵或3’磷酸酯中的至少一種。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述3’開環(huán)糖為3’-磷酸-α，β-不飽和醛（PA）。

16.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述DNA探針選自下列至少之一：

與所述RNA分子部分匹配的核酸片段；

含有6-30個任意核苷酸的核酸片段的混合物。

17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括：

將所述第二RNA-DNA復(fù)合體進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄處理，以便獲得反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。

18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，包括：

對所述反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行環(huán)化處理，以便獲得環(huán)化產(chǎn)物。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，包括:

基于所述反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物和所述環(huán)化產(chǎn)物的至少之一構(gòu)建測序文庫。