[發明專利]FOXC1基因突變體及其應用

有效

• 申請號: 201810565134.6
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN110551728B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 吳星;黃厚斌;李朝輝;王大江
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院;中國人民解放軍總醫院海南分院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C12Q1/6883;G01N33/68;A61K45/00;A61P27/02;A61P27/06
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發明提出了一種核酸。與野生型FOXC1基因相比，所述核酸具有下列突變：c.1494delG。根據本發明實施例的核酸與野生型FOXC1基因相比，其1494位的G堿基發生缺失，導致其所編碼的蛋白質與野生型FOXC1蛋白相比，在499位氨基酸處發生移碼，其所編碼的蛋白質為一個包含有517個氨基酸的新蛋白(稱為突變的FOXC1)。突變的FOXC1的499位氨基酸處發生移碼突變，與野生型FOXC1蛋白結構的末端55個氨基酸序列不同，突變的FOXC1蛋白缺失了C端大部分反式激活結構域，從而影響了FOXC1蛋白的反式激活功能。

技術領域

本發明涉及生物領域，具體地，本發明涉及FOXC1基因突變體及其應用，更具體地，本發明涉及核酸、基因突變、蛋白質、檢測核酸或基因突變或蛋白質的試劑在制備試劑盒中的用途、生物模型在篩選藥物中的用途、特異性改變核酸或基因突變或蛋白質的試劑在制備藥物中的用途、用于治療阿克森費爾德-里格爾綜合癥的藥物、篩選易感和/或患有阿克森費爾德-里格爾綜合癥的生物樣品的系統、篩選易感和/或患有阿克森費爾德-里格爾綜合癥的生物樣品的試劑盒、構建體以及重組細胞。

背景技術

阿克森費爾德-里格爾綜合癥(Axenfeld-Rieger syndrome，ARS)是較為罕見的遺傳疾病，在全世界的發病率約為1/200000。這是一組發育異常性疾病，大多數在嬰幼兒和兒童期發現，可呈家族性，為常染色體顯性遺傳，雙眼發病，無性別差異。約50％的患者發生青光眼，較多見于兒童或青少年期。如僅有角膜和房角的病變，稱Axenfeld異常(AxenfeldAnomaly,ARA)，如還有虹膜的病變，則稱Rieger異常，如伴有眼外的發育缺陷，主要為牙齒和面部發育缺陷：如牙齒缺損、小牙、無牙，面中部扁平、上頜骨發育不全則稱為綜合征。部分患者還伴隨有臍周皮膚異常，垂體疾病，耳聾，心臟缺陷，尿道下裂，生長遲緩和智力低下等癥狀。近年來的研究認為這兩種發育缺陷是同一起源的不同程度的表現，因此又統稱ARA或ARS。患者確診年齡一般在5～30歲，無明顯種族和性別因素。對已出現青光眼的患者，手術前先用藥物治療。但是Axenfeld-Rieger綜合癥導致的青光眼較其他類型的青光眼更難控制，最后可導致視神經萎縮并失明。在胚胎4至6個月時前房形成并分化成虹膜角膜角結構，此時如果角膜與虹膜間的中胚葉組織分化停滯，細胞和組織殘留，就會導致眼前節的異常。

近來的研究揭示神經嵴細胞是阿克森費爾德-里格爾或綜合征最可能受累的原始組織。從神經嵴細胞發育而來的眼前節組織在胚胎末期發育受阻，導致虹膜和虹膜角膜角原始內皮細胞的不正常和房水排出系統的變異。前腦、垂體腺、上頜部骨和軟骨及牙的大部分間質均起源于神經嵴細胞。故神經嵴發育異常也可解釋垂體、面骨及牙齒的發育異常。此外虹膜基質、脈絡膜、皮膚和頭發的色素細胞均自神經嵴的黑色素細胞發育而來。但用神經嵴細胞發育異常還不能解釋本征的所有臨床表現，如臍周皮膚皺褶過多和泌尿生殖系統異常等，A-R綜合征還涉及到除神經嵴以外的原始外胚胎層。目前已經發現的ARS兩個主要的致病基因為FOCX1和PITX2。目前已經報道在ARS患者中發現了有54個FOXC1突變，其中31個為錯義突變，缺失/插入/重復突變有17個，無義突變為6個。大部分點突變都位于FOCX1的FHD區域。

連鎖分析結合候選基因篩查技術是經典的確定致病基因的策略，需要遺傳樣本量較大，數據產出速度較慢，定位不夠精確。而高通量測序技術具有通量高、成本低、測序時間短、測序流程簡捷、信息量豐富等諸多優勢，近年來在遺傳相關性疾病尤其單基因遺傳性疾病研究方面發揮了越來越重要的作用，其中外顯子組測序技術(Exome sequencing)已被證明可以降低單基因疾病候選基因數量，甚至發現其致病基因的有效手段，其優勢在于僅通過對幾個很少的個體(包括患者及正常對照)的外顯子組進行測序、篩選就可以確定與疾病相關的基因變異，并且可以降低實驗成本并提高其效率和成功率。

發明內容

本申請是基于發明人對以下事實和問題的發現和認識作出的：