[發明專利]一種以葉片誘導不定芽的龍珠果組織培養方法

有效

• 申請號: 201810565126.1
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN108782243B
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 段俊;劉艷艷;何春梅
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 44001 廣州科粵專利商標代理有限公司
• 代理人: 劉明星;朱雙<國際申請>=<國際公布>=

1.一種以葉片誘導不定芽的龍珠果組織培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.外植體的準備：取龍珠果葉片，經消毒后，將葉片切塊作為外植體；

b.誘導不定芽：將外植體以葉片近軸面朝上的方式接入不定芽誘導培養基培養，誘導出不定芽；

所述的不定芽誘導培養基：每升含有TDZ0.005～0.02mg、瓊脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的MS培養基，pH5.7～5.8；

c.生根壯苗培養：將不定芽轉接到生根壯苗培養基培養，獲得生根苗；

所述的生根壯苗培養基：每升含有IBA0.05～0.2mg、瓊脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的1/2MS培養基，pH5.7～5.8；

d.煉苗及移栽：將生根苗煉苗，移栽，進行培養管理，得到龍珠果植株；

所述的步驟d的煉苗及移栽，是當生根苗長至8～10cm高時，將培養瓶打開瓶蓋后轉移到自然光下煉苗7～10d；然后取出生根苗并用自來水將根部的培養基沖洗干凈，種植于將泥炭土：蛭石：珍珠巖以體積比2:1:1混勻得到的基質中，適時澆水。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟a的消毒是將龍珠果葉片用無菌水清洗2～3次，然后用體積分數75％乙醇水溶液將葉片正反面擦拭后，再用無菌水清洗2～3次，然后用加有終濃度為質量分數0.02％的Tween-20的質量分數0.1％的HgCl₂溶液浸泡3～5min，最后用無菌水沖洗4～5次。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟b的將外植體接入不定芽誘導培養基培養，是將外植體以葉片近軸面朝上的方式接入不定芽誘導培養基培養。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟b、c中的培養條件為溫度25±2℃、光照強度1500～2000lx、光照時間12h/d。