[發明專利]一種以葉片誘導不定芽的龍珠果組織培養方法

有效

• 申請號: 201810565126.1
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN108782243B
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 段俊;劉艷艷;何春梅
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 44001 廣州科粵專利商標代理有限公司
• 代理人: 劉明星;朱雙<國際申請>=<國際公布>=

本發明公開了一種以葉片誘導不定芽的龍珠果組織培養方法。本發明以龍珠果葉片作為外植體，經消毒后得到污染率極低、傷害較小的外植體，消毒成功的外植體在不定芽誘導培養基中誘導得到不定芽，再經生根壯苗、移栽等過程得到長勢良好的龍珠果植株；該方法具有培養周期短，速度快、出苗快的特點。本發明具有取材方便、材料利用率高、繁殖周期短、操作簡單、適用于工廠化生產等優點，建立了以龍珠果葉片為外植體的組織培養快繁體系，為開展龍珠果快速繁殖提供育苗技術。

技術領域

本發明屬于植物組織培養領域，具體涉及一種以葉片誘導不定芽的龍珠果組織培養方法。

背景技術

龍珠果(Passiflorafoetida L.)，又名香花果、天仙果、野仙桃等，為西番蓮科西番蓮屬草質藤本植物。原產于西印度群島，在我國主要分布于廣東、海南、福建和臺灣等地，生長于荒山草坡、灌叢或近海邊沙灘(王東等，2014)。

龍珠果植株高數米，整株尤其是損傷的葉片常散發出辛辣的味道；莖具條紋且有平展柔毛；葉膜質，表面有柔毛，寬卵形或長圓狀卵形，基部心形且有3～5個淺裂，邊緣不規則，葉脈羽狀；葉柄具平展柔毛；托葉半抱莖，深裂；聚傘花序，花白色或淡紫色，具白斑；苞片3枚；萼片5枚；花瓣5枚；漿果卵圓球形，無毛；種子多數，橢圓形，草黃色；花期7～8月，果期翌年4～5月(中國植物志，1999)。龍珠果花朵秀麗，顏色多變，具有一定的觀賞價值；果實外形美觀，香甜可食，具有一定的經濟價值；全株可入藥，具有一定的藥用價值。

龍珠果中主要含有黃酮類化合物，其主要成分有牡荊素、異牡荊素、葒草素、異葒草素等(中華本草，1999)。龍珠果具有清熱解毒、清肺止咳之功效，臨床多用于治療肺熱咳嗽、小便混濁、癰瘡腫毒、外傷性眼角膜炎、淋巴結炎等癥(姬生國等，2012；中國植物志，1999)。國外研究表明，龍珠果提取物在治療酒精、尼古丁、嗎啡及大麻酚的藥物成癮性方面療效較好(Sasikala等，2011；Sathish等，2011)。果實可用作催吐劑、用果實煎煮可用于治療哮喘；葉片外敷可治療創傷，干燥的葉片泡茶有助于解決睡眠問題；根可用于調經并且對治療過度興奮和暴躁有作用(Deshaprabhu，1966；Krishnaveni和Thaakur，2008)。

組織培養具有快速、大量、遺傳穩定性好等優點。利用組織培養技術進行植物快速繁殖有利于解決種子來源稀少或種子萌發困難植物的繁殖問題、挽救珍稀瀕危物種、解決藥用植物野生資源短缺等問題。目前，國內學者對龍珠果的研究主要集中在成分測定、藥理作用等方面，組織培養相關的研究報道較少。國外雖有龍珠果組織培養相關的研究，但所用的外植體多見于龍珠果種子、莖段等部位，未見以龍珠果葉片為外植體直接誘導不定芽的相關報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種操作性強、繁殖效率高、生產周期短、能用于工廠化生產的以葉片誘導不定芽的龍珠果組織培養方法，通過該方法可以對龍珠果進行大量、快速繁殖。

本發明的以葉片誘導不定芽的龍珠果組織培養方法，包括以下步驟：

a.外植體的準備：取龍珠果葉片，經消毒后，將葉片切塊作為外植體；

b.誘導不定芽：將外植體以葉片近軸面朝上的方式接入不定芽誘導培養基培養，誘導出不定芽；

所述的不定芽誘導培養基：每升含有TDZ 0.005～0.02mg、瓊脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的MS培養基，pH 5.7～5.8；

c.生根壯苗培養：將不定芽轉接到生根壯苗培養基培養，獲得生根苗；

所述的生根壯苗培養基：每升含有IBA0.05～0.2mg、瓊脂6.0～7.0g、蔗糖20～30g和余量的1/2MS培養基，pH 5.7～5.8；

d.煉苗及移栽：將生根苗煉苗，移栽，進行培養管理，得到龍珠果植株。