[發明專利]具有抗腫瘤活性的吲哚生物堿及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810564427.2
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN108822116A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 譚仁祥;林麗萍
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: C07D491/044
• 分類號: C07D491/044;C07D209/36;A61K31/407;A61K31/404;A61P35/02;C12P17/18;C12P17/16;C12R1/645
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 楊海軍

本發明公開了一類吲哚生物堿，本發明從投喂吲哚?3?甲醇的大刀螳螂腸道真菌IFB?TL01(Daldinia?eschscholzii)的發酵液中提取的一類吲哚生物堿。本發明所述吲哚生物堿Dalesindole?B(化合物1)為新化合物，Dalesindole?C(化合物2)為新骨架化合物。藥理實驗結果表明對多種腫瘤細胞的增殖有抑制活性，特別是可以選擇性抑制HL?60白血病腫瘤細胞，可以作為抗腫瘤藥物。

技術領域

本發明屬于微生物工程技術和藥理學領域，具體涉及從投喂吲哚-3-甲醇的大刀螳螂腸道真菌炭球菌屬(Daldinia)光輪層炭殼IFB-TL01(Daldinia eschscholzii)的發酵液中提取的一類吲哚生物堿及其制備方法和應用。

背景技術

新化合物的發現和運用，對于新藥研發具有非常重要的作用。其中吲哚生物堿是一類含有吲哚或二氫吲哚結構的有機分子。由于吲哚類化合物具有非常廣泛的藥理活性，如抗血小板聚集，抗炎，抗菌，抗腫瘤，殺蟲以及免疫抑制等，從而引起人們的廣泛關注。特別是吲哚環中C-2，C-3位取代是制備系列結構和生物活性多樣的生物堿的有效方法。

當今社會，癌癥已經嚴重威脅人類健康，成了當之無愧的“第一殺手”。白血病是造血系統的惡性腫瘤，俗稱“血癌”，在我國的發病率約為3/10萬～4/10萬人口，多發生于青少年，是35歲以下發病率、病死率最高的惡性腫瘤，其中急性白血病發病急、發展快、病死率最高。目前，我國各地區的白血病發病率在成人各類腫瘤中占第六位，位居兒童腫瘤的首位，且近年來呈增長的趨勢，每年至少以3萬-4萬的速度增加，這不得不引起我們的重視。據調查，我國10歲以下小兒白血病的發病率為7/10萬，任何年齡均可能發病，男性發病率高于女性。然而，面對白血病，目前的化療藥物仍然存在治療有效率偏低，耐藥性等問題，嚴重制約白血病患者的治療效果和生命質量。因此，從天然產物中尋找有效的白血病治療藥物已經成為國內外重要的研究課題。

發明內容

發明目的：本發明的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種從投喂吲哚-3-甲醇的大刀螳螂腸道真菌炭球菌屬(Daldinia)光輪層炭殼IFB-TL01(Daldiniaeschscholzii)的發酵液中分離得到的吲哚生物堿；本發明另一個目的是提供吲哚生物堿的制備方法和應用。

技術方案：為了實現以上目的，本發明采取的技術方案為：

具有抗腫瘤活性的吲哚生物堿，其結構式為：

本發明所述的具有抗腫瘤活性的吲哚生物堿的制備方法，其包括以下步驟：

(1)將炭球菌屬Daldinia光輪層炭殼Daldinia eschscholzii IFB-TL01的菌塊接種于麥芽培養基中，于搖床上，培養2～3天，作為種子液；

(2)將步驟(1)所得的種子液接種到新的麥芽培養基中，繼續培養2～3天，并且分別于24，48，72小時投喂吲哚-3-甲醇，至溶液中的終濃度為1.0mM，同等條件下繼續培養8～10天；

(3)對步驟(2)所得培養液經紗布過濾，濾液用乙酸乙酯萃取，離心、濃縮得到黑色浸膏A；

(4)對步驟(3)所得浸膏A進行硅膠柱層析分段，用石油醚：丙酮進行梯度洗脫，得到7個洗脫部分A1-A7；

(5)取步驟(4)的A3段采用硅膠柱層析，采用石油醚：丙酮梯度洗脫，獲得F1–F7 7個洗脫部位，取F3餾分經Sephadex LH-20柱層析，甲醇洗脫，甲醇洗脫液上高壓制備液相，純化獲得化合物Dalesindole B(化合物1)；

(6)取步驟(4)的A4段經C-18柱層析梯度洗脫，獲得餾分A4a–A4e，餾分A4c經ODS柱梯度洗脫，獲得餾分A4c1–A4c6，A4c5經凝膠柱層析，半制備液相洗脫純化，獲得化合物Dalesindole C(化合物2)。