[發明專利]一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法

在審

• 申請號: 201810563864.2
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN108812310A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 蔡宣梅;方少忠;郭文杰;張潔;楊成龍
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

1.一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，包括無菌外植體的獲取，其特征在于：經過下列步驟進行培養：

1）消毒處理：選擇已分化出胚根的華重樓種子，洗凈后將胚根切除干凈，剩下的部分作為外植體，在超凈工作臺上將外植體先用酒精浸泡，再用升汞消毒，最后用無菌水沖洗3～4次；

2）誘導培養：將消毒處理后的外植體接種在誘導培養基上，在溫度20±2 ℃、黑暗條件下培養50-60 d獲得愈傷組織；

所述誘導培養基為MS 培養基，誘導培養基中各成分及其濃度如下：

6- BA 2.0-3.0 mg·L^-1

NAA 0.3-0.5 mg·L^-1

2，4-D 0.1-0.3 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

瓊脂 7200-7500 mg·L^-1

3）增殖培養：在無菌條件下，將步驟2）獲得的愈傷組織分切成1-3 cm³大小后轉入增殖培養基中，在溫度24±2℃，黑暗條件下培養30-50 d，愈傷組織大量增殖；

所述增殖培養基為MS 培養基，增殖培養基中各成分及其濃度如下：

6- BA 1.0-2.0 mg·L^-1

NAA 0.2 mg·L^-1

2，4-D 0.1 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

瓊脂 7200-7500 mg·L^-1

4）分化培養：將步驟3）獲得的愈傷組織分切成1-3 cm³大小后轉入分化培養基中，在溫度24±2℃，黑暗條件下培養50-70 d，愈傷組織即可分化出小塊莖；

所述分化培養基為MS 培養基，分化培養基中各成分及其濃度如下：

6- BA 1.0 mg·L^-1

NAA 0.2 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

瓊脂 7200-7500 mg·L^-1

5）膨大和生根培養：將步驟4）獲得的小塊莖分切成單個后轉入膨大和生根培養基中，在溫度24±2 ℃，黑暗條件下培養70-90 d，小塊莖迅速膨大及生根；

所述膨大和生根培養基為MS 培養基，膨大和生根培養基中各成分及其濃度如下：

6- BA 1.0 mg·L^-1

NAA 0.1 mg·L^-1

IAA 0.1 mg·L^-1

蔗糖 58000-60000 mg·L^-1

瓊脂 7200-7500 mg·L^-1

6）移栽：當步驟5）培養的塊莖的根長為0.5-2.0 cm時，取出塊莖，洗去根部的培養基后移栽到基質中生長。

2.根據權利要求1所述的一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，其特征在于：步驟1）中，所述浸泡用的酒精濃度為70-75%，浸泡時間為25-35 s。

3.根據權利要求1所述的一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，其特征在于：步驟1）中，所述消毒用的升汞濃度為0.1-0.15%，消毒時間為8-10 min。

4.根據權利要求1所述的一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，其特征在于：步驟2）-步驟5）中，培養基的pH均為5.6-6.0。

5.根據權利要求4所述的一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，其特征在于：步驟2）-步驟5）中，培養基的pH均為5.8。