[發明專利]一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法

在審

• 申請號: 201810563864.2
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN108812310A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 蔡宣梅;方少忠;郭文杰;張潔;楊成龍
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

本發明公開了一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，該方法將已分化出胚根的華重樓種子作為外植體，經過愈傷組織誘導和增殖培養，達到較高的繁殖率后，再經過分化培養和塊莖膨大及生根培養，移栽，可以大量繁殖華重樓種苗并縮短華重樓藥材生長期。本發明解決了現有技術中存在的華重樓種苗繁殖率低，生長緩慢，不能滿足現有市場對華重樓種苗需求的問題。采用本發明方法，2年繁殖率可達60000倍以上，比常規種子繁殖快很多。本發明不僅繁殖率高，還縮短了華重樓藥材的田間生長期，并且組培塊莖的定植成活率高，適用于華重樓的規模化生產。

技術領域

本發明屬于植物繁育技術領域，具體涉及一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法。

背景技術

華重樓又名七葉一枝花，是珍貴中藥材。華重樓種子因具有自然繁殖率低，種胚發育不完全，胚乳堅硬和胚軸后熟等具有明顯“雙重休眠”的特性，因此其種子播種后通常需要經歷兩個冬天才能萌發，其成苗生長時間長。而常規根莖切段育苗，由于土壤溫度和濕度無法控制，切口愈合不理想，易感染病菌類而導致整塊根莖潰爛，種質材料損失高；此外潛伏芽萌發時間長，萌發率低，多芽同時萌發較少，從而導致總的繁殖系數降低，繁殖生產出的種苗質量差。

利用組織培養的方法進行快速繁殖，具有繁殖系數大、去病毒、迅速更新品種等優點，在百合上已有許多成功的報道。而華重樓的組培尚未見系統研究及應用。

目前華重樓的組織培養主要集中在種子的無菌萌發、愈傷組織誘導和培養方面，關于華重樓組培苗增殖及生根方面的研究，以及試管根莖增殖及膨大方面的研究較少。

中國專利CN201310529238.9公開了一種華重樓植株的快速繁殖方法，該專利采用的是華重樓的根莖作外植體，存在以下缺點：由于根莖長在土壤中，導致初代培養污染十分嚴重，此外由于根莖本身是藥材，且一般只有前部一、兩個芽體能誘導出愈傷組織，因此該方法會浪費大量的原材料。

發明內容

本發明的目的在于提供一種繁殖速度快、數量多的高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，以滿足市場需求。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種高效誘導華重樓種苗繁殖的方法，包括無菌外植體的獲取，經過下列步驟進行培養：

1）消毒處理：選擇已分化出胚根的華重樓種子，先用流水沖洗干凈，再用洗衣粉浸泡，用刷子輕刷，然后用自來水沖洗干凈，然后將胚根切除干凈，剩下的部分作為外植體，在超凈工作臺上將外植體先用酒精浸泡，再用升汞消毒，最后用無菌水沖洗3～4次；

2）誘導培養：將消毒處理后的外植體接種在誘導培養基上，在溫度20±2 ℃、黑暗條件下培養50-60 d獲得愈傷組織；

所述誘導培養基為MS 培養基，誘導培養基中各成分及其濃度如下：

6- BA 2.0-3.0 mg·L^-1

NAA 0.3-0.5 mg·L^-1

2，4-D 0.1-0.3 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

瓊脂 7200-7500 mg·L^-1

3）增殖培養：在無菌條件下，將步驟2）獲得的愈傷組織分切成1-3 cm³大小后轉入增殖培養基中，在溫度24±2℃，黑暗條件下培養30-50 d，愈傷組織大量增殖；

所述增殖培養基為MS 培養基，增殖培養基中各成分及其濃度如下：

6- BA 1.0-2.0 mg·L^-1