[發(fā)明專利]一種構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的方法及相應(yīng)的接頭序列和試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810563270.1
• 申請(qǐng)日: 2018-06-04
• 公開（公告）號(hào): CN108753923A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹亮;束文圣;吳勝標(biāo);王璋;郝祎琪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州微芯生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806;C12Q1/6869;C12N15/11;C12N15/10;C40B50/06
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1.一種用于構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的接頭序列，其特征在于，所述接頭序列的5’端用磷酸修飾，且靠近5’端的GATCGGAAGAGC與靠近3’端的GCTCTTCCGATC形成雙鏈莖結(jié)構(gòu)，其余堿基形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)；3’端最后一個(gè)堿基為T，并以硫代修飾；同時(shí)，所述接頭序列中的胞嘧啶堿基經(jīng)過甲基化修飾。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的接頭序列，其特征在于，所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)至少包含2個(gè)堿基，所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)的中間還以C3～C21修飾。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的接頭序列，其特征在于，所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)上的堿基為39個(gè)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的接頭序列，其特征在于，所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)的中間以1～3個(gè)C18修飾。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的接頭序列，其特征在于，所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)的中間以1個(gè)C18修飾。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的接頭序列，其特征在于，所述環(huán)狀結(jié)構(gòu)由19個(gè)堿基+C18+20個(gè)堿基構(gòu)成。

7.一種構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、提取樣品的基因組DNA，進(jìn)行DNA分子的打斷；

S2、將打斷的DNA分子進(jìn)行末端修復(fù)和加A；

S3、在經(jīng)過末端修復(fù)和加A的DNA分子兩端加入權(quán)利要求1～4中任意一條權(quán)利要求所述的接頭序列；

S4、對(duì)加入接頭序列的DNA分子進(jìn)行重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化，然后進(jìn)行擴(kuò)增，得到甲基化測(cè)序文庫。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的方法，其特征在于，所述接頭序列的濃度為5～20μM。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的方法，其特征在于，所述接頭序列的濃度為15μM。

10.一種用于構(gòu)建甲基化測(cè)序文庫的接頭試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1～6中任意一條權(quán)利要求所述的接頭序列。