[發明專利]一種利用兔胎兒成纖維細胞制備玉米赤霉烯酮單克隆抗體的方法

在審

• 申請號: 201810560697.6
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN108795879A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 宋紹征;周麗;伍燕華;鄒曉蘭;羅長財;吳建彬;李林
• 申請（專利權）人: 無錫中德伯爾生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種兔胎兒成纖維細胞的新用途，尤其涉及一種利用兔胎兒成纖維細胞制備玉米赤霉烯酮單克隆抗體的方法，所述兔胎兒成纖維細胞用作鼠源雜交瘤細胞的飼養層細胞，對小鼠雜交瘤細胞進行培養，能夠完全替代鼠源飼養層細胞，促進單克隆雜交瘤細胞的生長，產生效價高、穩定性好、特異性強的單克隆抗體；由不同動物的細胞作為飼養層細胞培育出的雜交瘤細胞用于制備抗體，具有很高的效價和特異性，同時該胎兒成纖維細胞可凍存后復蘇多次使用，無需每次動物組織分離培養，方法簡單，成本低廉，制備出能夠用于快速、靈敏、經濟、高效的單克隆抗體，具有廣闊的應用前景和巨大的市場價值。

技術領域

本發明涉及生物免疫技術領域，涉及一種兔胎兒成纖維細胞的新用途，尤其涉及一種利用兔胎兒成纖維細胞制備玉米赤霉烯酮單克隆抗體的方法。

背景技術

玉米赤霉烯酮(ZearaLenone，ZEN)，又稱F2毒素，是由禾谷鐮刀菌等菌種產生具有雌激素作用真菌毒素。ZEN首先從赤霉病玉米中分離出，故命名為“玉米赤霉烯酮”，是玉米赤霉菌的代謝產物，其化學名為6-(10-羥基-6氧基-十一碳烯基)β-雷鎖酸內酯，廣泛存在于霉變的玉米、高粱、小麥、燕麥、大麥等谷類作物以及奶中，產生玉米赤霉烯酮最常見菌屬是禾谷鐮刀菌，此外為三線鐮刀菌、木賊鐮刀菌、雪腐鐮刀菌、粉紅鐮刀菌等，對人類和動物可產生多種毒副作用。ZEN具有類雌激素樣作用、生殖發育毒性、免疫毒性、細胞毒性、肝毒性，對腫瘤產生也有一定影響，還可導致動物的生產性能下降、免疫抑制，給畜牧業帶來了很大的經濟損失，甚至會對人類和動物的健康造成嚴重的危害。

谷實類原料在田間、收獲過程、收獲后儲藏期間以及飼料和食品成品儲存、使用等諸多環節中，都有可能受到ZEN的污染，PLacinta等(1999)對二十多個國家的谷物和動物飼料及飼料原料中的霉菌毒素污染情況作了調查研究，發現大多數國家的谷物和動物飼料中都不同程度地受到ZEN的污染。目前大多數國家對食品、谷物、飼料中ZEN含量都有十分嚴格規定，如澳大利亞規定黑麥中ZEN含量不得超過60μg/kg；意大利規定谷物和谷類產品中ZEN含量不能超過100μg/kg；法國規定植物油和谷類中ZEN含量必須低于200μg/kg。我國《GB2715–2005糧食衛生標準》規定供人食用小麥、玉米中ZEN不超過60μg/kg，《GB13078.2–2006飼料衛生標準》規定飼用玉米和配合飼料中ZEN最大含量為500μg/kg。

ZEN污染飼料和食品后，不僅使農業經濟受到嚴重影響，且還會帶來嚴重食品安全問題，威脅到人類健康。因此，為了確保食品和飼料安全，對ZEN進行快速、靈敏而準確測定非常重要。目前檢測ZEN的方法主要有薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質譜法(LC-MS)、氣相色譜-質譜法(GC-MS)、膠體金和酶聯免疫吸附法(ELISA)等。采用色譜分析需要昂貴的儀器，復雜的樣品預處理(凈化，濃縮或衍生)和大量的有機溶劑和其他化學品，操作人員要求高，不能滿足基層單位大規模篩選和現場抽檢的需要；而膠體金和酶聯免疫吸附法屬于免疫學范圍，具有簡便、靈敏、快捷、成本低、適合大批量檢測等特點，尤其適合我國很多生產企業單位的自檢和抽查快檢，以及適于現場樣品的大量篩查等，近年來備受人們的關注。

免疫學方法的基礎在于抗體的獲得，目前國內該類抗體的制備技術還仍然是傳統的雜交瘤細胞技術，飼養層細胞主要是小鼠來源的各種細胞(如腹腔巨噬細胞、小鼠成纖維細胞等)，每次使用需飼養并處死大量小鼠，浪費資源，不利于動物保護，因此，提供一種新的鼠源雜交瘤細胞的飼養層細胞，具有廣闊的應用前景和巨大的市場價值。

發明內容

針對現有技術的不足及實際的需求，本發明提供一種利用兔胎兒成纖維細胞制備玉米赤霉烯酮單克隆抗體的方法，采用兔胎兒成纖維細胞作為飼養層細胞進行小鼠雜交瘤細胞培養，能夠在促進單克隆雜交瘤細胞的生長，同時該成纖維細胞可凍存后復蘇多次使用，無需每次動物組織分離培養，具有廣闊的應用前景和巨大的市場價值。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：