[發明專利]一種利用兔胎兒成纖維細胞制備玉米赤霉烯酮單克隆抗體的方法在審
| 申請號： | 201810560697.6 | 申請日： | 2018-05-25 |
| 公開（公告）號： | CN108795879A | 公開（公告）日： | 2018-11-13 |
| 發明（設計）人： | 宋紹征;周麗;伍燕華;鄒曉蘭;羅長財;吳建彬;李林 | 申請（專利權）人： | 無錫中德伯爾生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/20 | 分類號： | C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 214174 江蘇省無錫市惠山*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 胎兒成纖維細胞 單克隆抗體 制備 飼養層細胞 玉米赤霉烯酮 效價 單克隆雜交瘤細胞 鼠源雜交瘤細胞 小鼠雜交瘤細胞 雜交瘤細胞 動物組織 多次使用 分離培養 特異性強 新用途 凍存 抗體 鼠源 種兔 靈敏 復蘇 細胞 生長 替代 培育 應用 | ||
1.一種兔胎兒成纖維細胞用于培養鼠源雜交瘤細胞的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述兔胎兒成纖維細胞取自剖腹產的兔胎兒。
3.根據權利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述兔胎兒的周齡為1-3周，優選為2周。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的用途，其特征在于，所述兔胎兒成纖維細胞的獲取方法包括如下步驟：
(1)取妊娠1-3周的母兔并進行麻醉；
(2)手術刨宮產取出兔胎兒；
(3)去除步驟(2)取出的兔胎兒的頭、四肢和內臟后，將剩余組織剪碎并消化成單細胞；
(4)將步驟(3)得到的細胞接種并培養后凍存備用。
5.根據權利要求4所述的用途，其特征在于，步驟(1)所述的妊娠時間為2周；
優選地，步驟(1)所述麻醉的步驟為：阿托品皮下注射0.5-2mg/kg體重，間隔10-20min，舒泰-50肌肉注射5-20mg/kg體重；
優選地，步驟(3)所述剪碎的大小為0.5-2mm3；
優選地，步驟(3)所述消化的方法為酶消化法，優選為胰酶消化法；
優選地，步驟(4)所述細胞接種的密度為1×105-5×106個/mL。
6.根據權利要求1-5任一項所述的用途，其特征在于，所述培養鼠源雜交瘤細胞的方法包括如下具體步驟：
(1)制備已含100μL/孔的兔胎兒成纖維細胞的96孔板；
(2)用培養液稀釋雜交瘤細胞，每個濃度的細胞懸液以100μL/孔的量分別加入步驟(1)得到的96孔板的4列共32個孔中；
(3)培養4-5天在倒置顯微鏡下可見克隆長出，記錄下每孔中克隆生長情況；
(4)培養7-10天，根據克隆生長快慢，抽取培養上清液進行檢測。
7.一種鼠源雜交瘤細胞，其特征在于，所述鼠源雜交瘤細胞采用兔胎兒成纖維細胞培養得到；
優選地，所述鼠源雜交瘤細胞分泌玉米赤霉烯酮單克隆抗體。
8.一種玉米赤霉烯酮單克隆抗體，其特征在于，所述玉米赤霉烯酮單克隆抗體由權利要求7所述的鼠源雜交瘤細胞分泌得到。
9.一種如權利要求7所述的鼠源雜交瘤細胞和/或如權利要求8所述的玉米赤霉烯酮單克隆抗體用作制備免疫膠體金檢測試劑盒和/或藥物。
10.一種如權利要求7所述的鼠源雜交瘤細胞、如權利要求8所述的玉米赤霉烯酮單克隆抗體或如權利要求9所述的試劑盒和/或藥物用于檢測食品、農產品或者環境樣品中的玉米赤霉烯酮污染。
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