[發明專利]一種鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法

在審

• 申請號: 201810554929.7
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108641963A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 宋微;王磊;張虎;楊廣榮;周莉;劉夢
• 申請（專利權）人: 江蘇農林職業技術學院
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/14;C12R1/645;C12R1/77
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 李倩

1.一種鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1，致病菌懸液的制備：取帶有葉斑的鐵線蓮葉片，切碎后置無菌生理鹽水中，混合物溶液的濃度為20～25％，于一定溫度下培養得到致病菌懸液；

步驟2，初篩培養基的制備：往PDA培養基中加入100u/mL青霉素，混合均勻后，滅菌，得到初篩培養基；

步驟3，致病菌落群培養：將步驟1中的致病菌懸液用無菌生理鹽水梯度稀釋成各個濃度的稀釋液，每個濃度下取1mL稀釋液涂布于步驟2的初篩培養基上進行培養，獲得致病菌落群；

步驟4，單菌落培養：挑取初篩培養基上長出的菌落，接種至含鐵線蓮汁的培養基中進行純培養，反復分：3～5次，獲得的單一菌落為致病菌落；

步驟5：從初篩菌種中篩選出鐵線蓮葉斑病致病菌，再進行鑒定，確定致病菌的種類。

2.根據權利要求1所述的鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于：步驟1中，致病菌懸液的培養條件為：于25℃，2500rpm振蕩條件下培養30～35min。

3.根據權利要求1所述的鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于：步驟2中，滅菌條件為121℃下滅菌25～30min。

4.根據權利要求1所述的鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于：步驟3中，對致病菌懸液進行梯度稀釋，得到的梯度稀釋液濃度為10^-5、10^-6、10^-7。

5.根據權利要求1所述的鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于：步驟3中，培養條件為24～26℃下培養72～78h。

6.根據權利要求1所述的鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于：步驟4中，含鐵線蓮汁的培養基中，鐵線蓮汁的質量濃度為10～15％。

7.根據權利要求1所述的鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于：步驟5中，篩選方法為培養基驗證和鐵線蓮驗證試驗。

8.根據權利要求1所述的鐵線蓮葉斑病致病菌的篩選方法，其特征在于：步驟5中，致病菌的種屬為：鐮刀菌屬、尖鐮孢菌和鏈格飽屬。