[發(fā)明專利]一種檢測四環(huán)素類藥物的時間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810553516.7
• 申請日: 2018-06-01
• 公開（公告）號: CN108508215A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何方洋;萬宇平;李旭;宋灝;吳小勝;王琳琛;馮才偉;王兆芹;韓光耀;周苑
• 申請（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種檢測四環(huán)素類藥物的時間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應(yīng)用。該試紙條包括試紙和微孔試劑，所述試紙包括底板及在底板上依次搭接粘貼的樣品吸收墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上固定有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，所述檢測區(qū)噴涂有四環(huán)素類藥物半抗原?載體蛋白偶聯(lián)物，所述質(zhì)控區(qū)噴涂有羊抗鼠抗抗體，所述微孔試劑中凍干有熒光微球標記的四環(huán)素類藥物單克隆抗體。本發(fā)明還提供了該試紙條的制備方法及應(yīng)用上述試紙條檢測樣品中四環(huán)素類藥物的方法。本發(fā)明提供的試紙條和檢測方法具有操作簡單、靈敏度高、檢測速度快、成本低的優(yōu)點，能夠?qū)崿F(xiàn)對大批量樣品中四環(huán)素類藥物的快速檢測和現(xiàn)場監(jiān)控。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全中非法添加物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種檢測四環(huán)素類藥物的時間分辨熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應(yīng)用。

技術(shù)背景

四環(huán)素類藥物(TCs)具有廣譜高效的殺菌抗生功效，可以與大多數(shù)藥物或飼料添加劑混用，已被廣泛應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)中。但過量使用不可避免地造成了嚴重的藥物殘留，成為嚴重危害人類健康的食品安全隱患之一，為此世界各國對TCs殘留的檢測十分關(guān)注。我國規(guī)定了牛奶中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留限量為100μg/L；歐盟第675/92號令中初步規(guī)定在肌肉及牛奶中的四環(huán)素族化合物的總量不得超過100μg/kg，在腎臟、肝臟及雞蛋中分別不得超過600μg/kg、300μg/kg及200μg/kg；日本肯定列表制度規(guī)定奶和雞蛋中四環(huán)素類化合物的總量分別不得超過100ng/mL和400ng/mg。因此，加強對四環(huán)素類藥物檢測技術(shù)的研究和快速檢測技術(shù)的發(fā)展是非常有必要的。

目前，檢測四環(huán)素類藥物比較經(jīng)典的方法有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法(LC-MS/MS)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)等，這些都是比較傳統(tǒng)的方法，也是目前的確證方法。另外，目前常用的還有酶聯(lián)免疫法(ELISA)。但由于以上方法均需先進的檢測儀器，檢測費用昂貴、步驟繁瑣耗時，且對操作人員專業(yè)性要求較高，不適用于基層企事業(yè)單位的大通量快速篩查檢測。膠體金免疫層析法具有檢測速度快、價格便宜、操作簡單等優(yōu)點，是目前國內(nèi)外檢測四環(huán)素類藥物的主要監(jiān)控方法，但仍存在一些缺陷，如穩(wěn)定性較差、靈敏度較低、無法實現(xiàn)定量檢測、基質(zhì)效應(yīng)明顯背景干擾大，且顏色單一，難以實現(xiàn)多檢和聯(lián)檢。

熒光微球免疫層析技術(shù)是繼膠體金免疫層析技術(shù)后，在熒光染料標記技術(shù)上發(fā)展起來的，作為一種免疫學檢測方法，它是免疫親和技術(shù)、免疫標記技術(shù)、免疫層析技術(shù)的結(jié)合，與膠體金免疫層析技術(shù)一樣具有快速、操作簡便等優(yōu)點。但是相比膠體金等傳統(tǒng)標記物，熒光微球的發(fā)光強度可以隨激發(fā)光的強度增強而增強，所以熒光微球標記有望提高免疫層析技術(shù)的檢測限；而在微球殼結(jié)構(gòu)的作用下，熒光微球具有相對穩(wěn)定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，粒度均一、單分散性好、穩(wěn)定性好、發(fā)光效率高、重復性好，有較好的生物相容性；且形成微球后染料熒光猝滅大大減少，發(fā)射強而穩(wěn)定，且基本不受外界環(huán)境介質(zhì)變化的影響。因此相比上述檢測方法，熒光微球免疫層析技術(shù)同時具有檢測靈敏度高、操作簡便、穩(wěn)定性好的優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是針對上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種靈敏度高、操作簡便、檢測快速、價格低廉的檢測四環(huán)素類藥物的時間分辨熒光免疫層析試紙條；本發(fā)明的另一個目的是提供上述試紙條的制備方法；本發(fā)明的再一個目的是提供上述試紙條在檢測四環(huán)素類藥物中的應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的一個技術(shù)方案是：

提供一種檢測四環(huán)素類藥物的時間分辨熒光免疫層析試紙條，它包括試紙和微孔試劑，所述試紙包括底板及在底板上依次搭接粘貼的樣品吸收墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述硝酸纖維素膜上固定有檢測區(qū)和質(zhì)控區(qū)，所述檢測區(qū)噴涂有四環(huán)素類藥物半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物，所述質(zhì)控區(qū)噴涂有羊抗鼠抗抗體，所述微孔試劑中凍干有熒光微球標記的四環(huán)素類藥物單克隆抗體。