[發(fā)明專利]一種痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法及超聲聚集裝置

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810552739.1
• 申請(qǐng)日: 2018-05-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108982200A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許太林;羅勇;張學(xué)記
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N1/40
• 分類號(hào): G01N1/40
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 皋吉甫

本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法及超聲聚集裝置；所述痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法是在超聲條件下將DNA修飾的金納米顆粒與待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子結(jié)合，再改變超聲頻率以聚集金納米顆粒，最終實(shí)現(xiàn)所述待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子的痕量檢測(cè)。所述痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法具有響應(yīng)時(shí)間短、檢測(cè)效率高等優(yōu)勢(shì)，在實(shí)現(xiàn)快速精準(zhǔn)分析和超痕量檢測(cè)方面具有重要價(jià)值，為痕量標(biāo)志物的超靈敏檢測(cè)提供了一種高效可行的方案。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法及超聲聚集裝置。

背景技術(shù)

精準(zhǔn)醫(yī)療檢測(cè)的關(guān)鍵在于樣品的富集和分離處理。傳統(tǒng)的樣品分離富集方法主要有沉淀、蒸餾與揮發(fā)、溶劑萃取、離子交換、電化學(xué)以及膜分離等，這些方法主要利用不同物質(zhì)的理化性質(zhì)差異實(shí)現(xiàn)將同一類物質(zhì)從樣品基質(zhì)中分離出來(lái)，并進(jìn)一步純化、富集，甚至將待測(cè)組分進(jìn)行化學(xué)改性使之成為可測(cè)形式，從而提高分析的特異性、靈敏度與準(zhǔn)確性，為環(huán)境分析，藥物成分分析等提供了極好的樣品前處理手段。但是在復(fù)雜生物樣品中痕量待測(cè)物的富集處理方面，往往需要將特定物質(zhì)從同一類型的混合樣品中分離出來(lái)(如從混合的DNA樣品中分離特定片段的DNA)。傳統(tǒng)富集技術(shù)在靈敏度和特異性方面還不能滿足癌癥精準(zhǔn)分析的苛刻要求。因此開(kāi)發(fā)癌癥相關(guān)的痕量標(biāo)志物的快速高效富集與分離方法成為精準(zhǔn)醫(yī)療檢測(cè)研究的重中之重。

微納米顆粒的聚集效應(yīng)也是近來(lái)的研究熱題。研究者通過(guò)化學(xué)趨向性、光、磁等驅(qū)動(dòng)方式，都可以誘導(dǎo)和控制微納米顆粒聚集以完成復(fù)雜的任務(wù)，不過(guò)大多是通過(guò)刺激改變濃度的方式來(lái)驅(qū)動(dòng)納米顆粒運(yùn)動(dòng)聚集，這些方式都具有響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、聚集速度慢、驅(qū)動(dòng)不可逆、樣品檢測(cè)特異性低、富集時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提出一種痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法及超聲聚集裝置。所述痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法具有響應(yīng)時(shí)間短、檢測(cè)效率高等優(yōu)勢(shì)，在實(shí)現(xiàn)快速精準(zhǔn)分析和超痕量檢測(cè)方面具有重要價(jià)值，為痕量標(biāo)志物的超靈敏檢測(cè)提供了一種高效可行的方案。

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法，所述痕量目標(biāo)物的聚集檢測(cè)方法是在超聲條件下將DNA修飾的金納米顆粒與待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子結(jié)合，再改變超聲頻率以聚集金納米顆粒，最終實(shí)現(xiàn)所述待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子的痕量檢測(cè)。

進(jìn)一步地，所述聚集金納米顆粒的過(guò)程具體為：將所述DNA修飾的金納米顆粒加入含有已用生物染色劑修飾的待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子的溶液中，在超聲條件下，所述DNA修飾的金納米顆粒與所述待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子結(jié)合，結(jié)合后，改變超聲頻率，使金納米顆粒在超聲波控制下聚集，得到聚集物。

進(jìn)一步地，所述金納米顆粒的制備方法如下：

在含有檸檬酸三鈉和四氯金酸組成的混合溶液M中，加入還原劑硼氫化鈉進(jìn)行還原反應(yīng)，得到金納米種子溶液，再用三步種子法制備得到金納米顆粒；

進(jìn)一步地，所述DNA修飾的金納米顆粒的制備方法如下：

將所述金納米顆粒溶液調(diào)節(jié)pH至酸性，使其帶正電；將所述金納米顆粒溶液和巰基修飾的探針DNA分子加入緩沖溶液A中配成5nmol/L的金納米顆粒溶液，充分振蕩后離心，得到沉淀X，將所述沉淀X加入緩沖溶液B中并離心以除去游離的DNA分子，得到沉淀X₁，所述沉淀X₁即為DNA修飾的金納米顆粒；

進(jìn)一步地，所述待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子的痕量檢測(cè)具體內(nèi)容如下：所述聚集物充當(dāng)粗糙金屬基底，聚集的金納米顆粒間有被所述生物染色劑修飾的待測(cè)痕量目標(biāo)DNA分子，此時(shí)用顯微共聚焦拉曼光譜儀對(duì)不同聚集點(diǎn)進(jìn)行SERS檢測(cè)。

進(jìn)一步地，所述三步種子法的具體操作內(nèi)容為：

1)將所述金納米種子溶液加入到生長(zhǎng)溶液中靜置t₁小時(shí)后得到溶液A；