[發明專利]表面偶聯心肌肌鈣蛋白抗原的磁性高分子微球及其在檢測血清中心肌肌鈣蛋白中的應用

在審

• 申請號: 201810552662.8
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108593938A
• 公開（公告）日: 2018-09-28
• 發明（設計）人: 徐力;郭軼;劉鴻翔;徐婉琦
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 劉世純;王恩遠

一種表面偶聯心肌特異性肌鈣蛋白抗原的磁性高分子微球及其在檢測血清中心肌特異性肌鈣蛋白中的應用，屬于生物技術領域。本發明基于化學偶聯法將心肌特異性肌鈣蛋白抗原(cTnT抗原)偶聯到磁性高分子微球表面，從而制備表面具有cTnT抗原的功能化磁性高分子微球，該微球可用于血清中心肌特異性肌鈣蛋白濃度的檢測。本發明具快速獲取樣品、多參數分析、高分辨率等優點，本檢測方法操作簡便、可靠性強、獲取數據量大，而磁性高分子微球的應用，更是簡化了操作程序、減少非特異性吸附，本檢測手段應用競爭模式更是節省了試劑的損耗。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種表面偶聯心肌特異性肌鈣蛋白抗原的磁性高分子微球及其在檢測血清中心肌特異性肌鈣蛋白中的應用。

背景技術

急性心肌梗死(AMI)因持久而嚴重的心肌缺血所致的部分心肌急性壞死，是一種較為常見的臨床疾病，其主要特征是發病急，病情兇險，而且危害極大，及時的診斷并采取有效治療是降低該種疾病病死率、致殘率的主要措施。AMI的診斷標準有三個：缺血性胸痛臨床史、心電圖的動態演變、AMI的血清標志物的動態變化，其中血清學的動態變化是該疾病的診斷意義重大。目前對于急性心肌梗死的診斷大多采用的是心肌三項血清標志物(cTnT、Mb、CK-MB)聯合檢測診斷法，具有較高的應用價值，其中cTnT稱為心肌特異性肌鈣蛋白，美國及歐洲心臟病學會已經將cTnT的指標變化作為診斷AMI的首要條件。

磁性高分子微球是一種新型功能材料，其大的比表面積、磁導向性以及良好的生化活性等諸多優點，在生物醫學領域方面具有巨大的應用前景。磁性高分子微球具有強的磁響應性，如果在微球表面修飾抗原、抗體、寡聚核苷酸等生物探針，可以將靶向結合物快速與基質溶液分離，極大的縮短了樣品的分析時間，而且還能提高分離效率，大大的降低了非特異性吸附。利用磁性高分子微球強分離能力與一些生化檢測手段進行結合，可以提高大幅度提高檢測手段的靈敏度。基于磁性高分子微球表面修飾不同的功能基團或者結合單克隆抗體，從而與抗原等迅速分離，主要應用有酶固定、細胞快速分離、疾病標志物診斷等等方面都表現出廣闊的應用前景。

流式細胞術是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或者其他生物顆粒進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞或者微球，并能從其中測得多個參數，具有速度快、精準度高、準確性好的優點，是當今主流的定量分析技術之一。

發明內容

本發明目的在于提供一種表面偶聯心肌特異性肌鈣蛋白抗原的磁性高分子微球及其在檢測血清中心肌特異性肌鈣蛋白中的應用。

本發明基于化學偶聯法將心肌特異性肌鈣蛋白抗原(cTnT抗原)偶聯到磁性高分子微球表面，從而制備表面具有cTnT抗原的功能化磁性高分子微球。試劑如下：兔抗cTnT抗原的抗體，也即一抗，異硫氰酸(FITC)標記的山羊抗兔二抗(goat anti-rabbit IgG/FITC)，也即熒光二抗。